|
誰(shuí)動(dòng)了你的細(xì)胞——趕走支原體2017-12-07 11:07來源:威正翔禹生物
為什么有些細(xì)胞實(shí)驗(yàn)無法重復(fù)? 為什么有的細(xì)胞在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間里,都養(yǎng)不到**狀態(tài)? 為什么實(shí)驗(yàn)室中,超過一株以上的細(xì)胞都時(shí)好時(shí)壞? 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)……
如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因,而仍有上述一種或幾種情況,則高度提示——你的細(xì)胞可能被支原體污染了!
圖. 電鏡下的支原體
支原體污染普遍存在 據(jù)美國(guó)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時(shí),由于支原體直徑很小,僅在180nm~350nm之間,只有通過電鏡才能看到,不易被實(shí)驗(yàn)者肉眼發(fā)覺,支原體污染逐漸成為一個(gè)普遍存在的問題。 支原體污染的危害 支原體污染是個(gè)循序的過程,普通抗生素對(duì)其無效。因此,支原體污染有多煩人,相信實(shí)驗(yàn)人都領(lǐng)教過了。 1、細(xì)胞狀態(tài)不佳,生長(zhǎng)速度慢,實(shí)驗(yàn)無法推進(jìn)。 2、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。 3、一株污染的細(xì)胞成為實(shí)驗(yàn)室的污染源,對(duì)工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染,進(jìn)而污染其他細(xì)胞,導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染,實(shí)驗(yàn)受影響,數(shù)據(jù)無法重復(fù),預(yù)期結(jié)果出不來。 如何有效把支原體趕出細(xì)胞? 對(duì)于已耗費(fèi)很多時(shí)間、大量擴(kuò)增起來的細(xì)胞,或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過的細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了,怎么辦?由于前期工作量巨大,我們無法丟棄已有細(xì)胞。但由于價(jià)格原因,又無法使用那些昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體,同時(shí),實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染,讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn),以最終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體特效的抑制劑,通過對(duì)細(xì)胞的前期處理,中期加藥,逐步通過4代左右的培養(yǎng),從而將支原體污染徹底清除,確保試驗(yàn)順利推進(jìn),結(jié)果準(zhǔn)確。全世界此類試劑眾多,威正翔禹生物周圍的實(shí)驗(yàn)人做過很多嘗試,其中效果最確切且性價(jià)比很高的當(dāng)屬德國(guó)Minerva公司的ZellShield?祛除劑。 Zell Shield?是一種即用型新型復(fù)合抗生素,副作用極低,能有效地祛除細(xì)胞培養(yǎng)支原體、細(xì)菌、真菌污染。Zell Shield?使用方法簡(jiǎn)單,直接加入培養(yǎng)基中保護(hù)細(xì)胞。 它的原理:通過抑制支原體增殖中某種蛋白的合成,達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬?gòu)?fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。 特點(diǎn) 1、適用范圍廣 普通細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng) 2、無細(xì)胞毒性 目前,Zell Shield?對(duì)多種細(xì)胞系都無細(xì)胞毒性。 3、高效廣譜 祛除支原體效果明顯,同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、病原蟲、真菌等污染亦可有效預(yù)防。 4、操作簡(jiǎn)便 可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細(xì)胞中進(jìn)行消毒。 5、穩(wěn)定性高 在細(xì)胞孵育期內(nèi),Zell Shield?始終保持穩(wěn)定的活性。 6、低耐藥風(fēng)險(xiǎn) 精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險(xiǎn),多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會(huì)產(chǎn)生耐藥突變株。 操作步驟: **步:研究發(fā)現(xiàn),98%的支原體污染發(fā)生在細(xì)胞間隙。因此,首先要把細(xì)胞消化下來,放入離心管,懸浮沖洗,離心,棄上清,反復(fù)三次。此時(shí)可將細(xì)胞上大部分的支原體去除,為進(jìn)一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。 第二步:培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield?,細(xì)胞進(jìn)行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制,舊的支原體隨著細(xì)胞的換液逐步減少,通過4代左右的培養(yǎng),細(xì)胞中的支原體基本可被徹底清除。 注:使用ZellShield?時(shí),不需使用鏈青霉素。 此試劑價(jià)格約2200元/50ml,可保證大量細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)得以順利推進(jìn)。 總之,細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染發(fā)生頻繁。有時(shí)帶來的危害會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測(cè)和及時(shí)排除支原體污染,讓細(xì)胞在健康安全的環(huán)境下生長(zhǎng),為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,打下良好的基礎(chǔ)。 附:關(guān)于德國(guó)Minerva公司 Minerva Biolabs GmbH 公司是世界**的微生物污染控制公司,特別是支原體和軍團(tuán)菌的技術(shù)和產(chǎn)品,在世界上遙遙領(lǐng)先。公司總部設(shè)立于德國(guó)柏林,專注微生物污染檢測(cè)與清除產(chǎn)品的研發(fā)和銷售。 威正翔禹生物(Vian-saga),是德國(guó)Minerva公司十年來在中國(guó)的**合作伙伴,一直被國(guó)內(nèi)生物界譽(yù)為“值得持續(xù)信賴的優(yōu)秀供貨商”。為國(guó)內(nèi)眾多科研機(jī)構(gòu)、生物藥廠提供高效的支原體污染祛除保障,同時(shí),更以優(yōu)質(zhì)、可靠的原裝進(jìn)口血清,為國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供堅(jiān)實(shí)有力的試劑支持。
|