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威正翔禹生物科普:關于胎牛血清知識問答(二)

2017-12-21 10:38來源:威正翔禹生物

胎牛血清在細胞培養(yǎng)中受到很多實驗人的青睞,今天小編把關于胎牛血清的保存使用做一個整理,希望對于初次接觸細胞培養(yǎng)的你能夠有所裨益哦!

1、胎牛血清有必要做熱滅活嗎?  

答:實驗顯示,胎牛血清是不需要做熱滅活的。

1)首先胎牛血清置于50℃以上的溫度長達30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此,有些實驗室還是把胎牛血清的熱滅活作為常規(guī)來執(zhí)行。事實上, 熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。2Triglia和Linscott曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,C6僅達成年動物血清的1-3%,而其它補體成分僅有成年動物的5-50%,至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化。又有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用。3)此外,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負面的影響,對血清的加熱經(jīng)常導致血清中沉淀的產(chǎn)生,導致很多營養(yǎng)因子的損失。因此,胎牛血清已無需再滅活

總之,經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量

2、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?  

答:一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化

那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;(2)血清質(zhì)量不好,反復凍融的結(jié)果;(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細胞生長;(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。

有著“細胞完美搭檔”贊譽的Ausbian胎牛血清,早已在各大實驗室悄然流行。2014年,Ausbian血清商標已在中國商標局注冊,目前此商標屬上海威正翔禹生物科技有限公司**所有。Ausbian血清目前在中國市場主要為澳洲血源的產(chǎn)品,廣泛應用于中科院、醫(yī)科院、軍科院、細胞庫、北大、清華、復旦、浙大等科研院所及大學的重點細胞實驗。