國標GB4789.4—2016 沙門氏菌檢驗操作步驟

沙門氏菌(Salmonella)為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌，它比大腸桿菌細, 也是腸桿菌科的一種重要的致病細菌。如果食用了被沙門氏菌污染的食品或者藥品后，將會引起中毒，導致傷寒、腸熱癥、敗血癥和胃腸炎等疾病。根據(jù)美國疾病控制和預防中心(CDC)的統(tǒng)計， 每年在美國由沙門氏菌引發(fā)食源性疾病常常居于食源性疾病的前列，目前我們食品監(jiān)管部門依據(jù)國標GB4789.4—2016檢測沙門氏菌，具體操作步驟如下：

1預增菌

無菌操作稱取25g(mL)樣品，置于盛有225mLBPW 的無菌均質杯或合適容器內(nèi)，以8000r/min~10000r/min均質1 min~2 min，或置于盛有225 mLBPW 的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min~2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質，振蕩混勻。如需調(diào)整 pH，用1 mol/mL 無菌 NaOH 或HCl調(diào)pH 至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉至500mL錐形瓶或其他合適容器內(nèi)(如均質杯本身具有無孔蓋，可不轉移樣品)，如使用均質袋，可直接進行培養(yǎng)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)8h~18h。

如為冷凍產(chǎn)品，應在45 ℃以下不超過15min，或2 ℃~5 ℃不超過18h解凍。

2增菌

輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1mL，轉種于10mLTTB 內(nèi)，于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h~24h。

同時，另取1mL，轉種于10mL SC內(nèi)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h~24h。

3分離

分別用直徑3mm的接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個 XLD瓊脂平板(或 HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板)，于36℃±1℃分別培養(yǎng)40h~48h(BS瓊脂平板)或18h~24h(XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板)，觀察各個平板上生長的菌落。

沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板，締一生物為您推薦使用HiMedia公司（國際知名微生物公司）的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(貨號：MV1296），該培養(yǎng)基用植物蛋白胨取代了動物蛋白胨，安全性更高；并建立在Rambach培養(yǎng)基配方（2）基礎上。Rambach的配方，是基于沙門氏菌代謝丙二醇產(chǎn)酸的原理。但該培養(yǎng)基僅僅用顯色底物就能鑒別出沙門氏菌這一生化特性。它用于分離和鑒別沙門氏菌，與大腸菌群相區(qū)分，具有更高的敏感度。

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（貨號：MV1296）在35-37℃孵育24-48小時后觀察到的培養(yǎng)特征

4生化試驗

三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗、靛基質試驗或選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進行鑒定。推薦使用HiMedia公司沙門氏菌生化鑒定試劑盒（KB011）

沙門氏菌生化鑒定試劑盒（KB011）包含的生化鑒定反應有：

甲基紅試驗（MR） VP試驗 尿素酶 H2S產(chǎn)生 檸檬酸發(fā)酵 賴氨酸脫羧ONPG試驗

乳糖發(fā)酵 阿拉伯糖發(fā)酵 麥芽糖發(fā)酵 甘露醇發(fā)酵衛(wèi)矛醇發(fā)酵

5血清學鑒定

檢查培養(yǎng)物有無自凝性、多價菌體抗原(O)鑒定、多價鞭毛抗原(H)鑒定、血清學分型(選做項目)

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養(yǎng)和檢測領域，一如既往地為您帶來優(yōu)質的服務。如需詳細了解，可訪問公司官網(wǎng)：http://www.klyyp.com/ ；咨詢電話：400-166-8600。