HiMedia生產(chǎn)的快速鑒定紙的第三方獨(dú)立驗(yàn)證

HiMedia生產(chǎn)的快速鑒定紙的第三方獨(dú)立驗(yàn)證

HiMedia laboratories公司生產(chǎn)的HiDtect快速鑒定紙是得到CE認(rèn)證（歐洲）的，認(rèn)為符合文件98/79/EC中的“In Vitro Diagnostic Medical Devices Directive， Annex III”條款。同時(shí)，這類細(xì)菌學(xué)輔助鑒別產(chǎn)品生產(chǎn)工藝也通過了世界衛(wèi)生組織的GMP認(rèn)證，以及ISO13485（醫(yī)療器械）和ISO9001認(rèn)證。

對(duì)HiDtect的第三方驗(yàn)證是在2013年由印度一家環(huán)境科學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的。主要鑒定了最有代表性的5個(gè)產(chǎn)品：DT010，DT001，DT002，DT008，DT011。

DT011是對(duì)食品致病菌的快速鑒定。選擇了10張鑒定紙進(jìn)行檢驗(yàn)。

驗(yàn)證采用的標(biāo)準(zhǔn)菌株如下：

• 大腸埃希氏菌（ATCC 9132）

• 大腸埃希氏菌O157：H7(NCTC 12900)

• 金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）

• 鼠傷寒沙門氏菌(ATCC 23564)

• 蠟樣芽孢桿菌（ATCC 10876）

• 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（ATCC 19111）

• 福氏志賀氏菌（ATCC 25908）

驗(yàn)證采用的傳統(tǒng)培養(yǎng)基如下：

• 通用培養(yǎng)基：TSA

• 增菌培養(yǎng)基：緩沖蛋白胨水

• 選擇性培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂，Baird Parker瓊脂，XLD瓊脂，MYP瓊脂，PALCAM瓊脂和DCA培養(yǎng)基

• 驗(yàn)證培養(yǎng)基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養(yǎng)基，西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂，兔血漿，尿素瓊脂和Andrade蛋白胨水，以及鼠李糖和木糖紙片

驗(yàn)證采用了2種方法，分別為快速鑒定紙的操作方法（HiMedia公司提供）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用培養(yǎng)基驗(yàn)證菌種的SOP（EL/WI/5.6.3.3a）

驗(yàn)證采用了魚制品作為食品樣品。

操作人員將上述標(biāo)準(zhǔn)菌株接種在營養(yǎng)肉湯中，用于檢驗(yàn)菌種純度，并通過各自對(duì)應(yīng)的選擇培養(yǎng)基劃線分離和進(jìn)行生化試驗(yàn)。

操作人員將上述標(biāo)準(zhǔn)菌株也接種到魚制品中。將該制品接種到緩沖蛋白胨水中增菌18-24小時(shí)（35-37℃），使增菌后的接種量達(dá)到10-100cfu/ml）。進(jìn)行梯度稀釋，以使菌落獲得**純化。

取上述增菌后的不同稀釋度的樣品，在TSA平板上涂抹，在35-27度18-24小時(shí)進(jìn)行孵育。用無菌鑷子在無菌環(huán)境下夾起鑒定紙，用記號(hào)筆標(biāo)記以便于定位。將鑒定紙放到TSA平板表面，二者接觸30秒到1分鐘。然后將鑒定紙轉(zhuǎn)移到無菌的空白皿中，倒置孵育35-37℃、1-4小時(shí)。

將另外的TSA平板分為4個(gè)象限/板，上述標(biāo)準(zhǔn)菌株分別接種到不同象限中，孵育35-37℃、18-24小時(shí)。也用鑒定紙進(jìn)行轉(zhuǎn)印并孵育，步驟同上。

結(jié)果顯示，在HiDtect鑒定紙上，各個(gè)菌株的實(shí)際顯現(xiàn)顏色和預(yù)期基本一致，即：大腸埃希氏菌-紫色（相符）

金黃色葡萄球菌-金黃色（相符）

鼠傷寒沙門菌/福氏志賀氏菌-無色（相符）

蠟樣芽胞桿菌-淺綠色（大菌落）（相符）

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌 預(yù)期是藍(lán)綠色，實(shí)際顯示為藍(lán)色。

大腸埃希氏菌O157：H7預(yù)期為粉紫色，實(shí)際為紫色。

傳統(tǒng)培養(yǎng)基的鑒定結(jié)果如下：

傳統(tǒng)培養(yǎng)基進(jìn)行定量的結(jié)果如下：

采用HiDtect方法進(jìn)行定量的結(jié)果如下：

結(jié)論：

HiDtect快速鑒定紙DT010能快速鑒定下列微生物：大腸埃希氏菌、大腸埃希氏菌O157：H7、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門菌/福氏志賀氏菌、蠟樣芽胞桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。DT010鑒定紙能對(duì)食品病原菌快速可靠的檢測(cè)，在35-37℃孵育1-4小時(shí)內(nèi)可顯示出顏色變化。

-------------------------------------------------------------------------------------------------------

DT001  尿道病原菌快速鑒定紙

使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株包括：

大腸埃希氏菌——ATCC 9132

肺炎克雷伯菌——NCIM 2706

金黃色葡萄球菌——ATCC 25923

銅綠假單胞菌——NCIM 2036

糞腸球菌——NCIM 2080

使用的培養(yǎng)基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂，Baird Parker瓊脂，牛奶瓊脂，Slanetz Bartley瓊脂

驗(yàn)證培養(yǎng)基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養(yǎng)基，西蒙檸檬酸鹽瓊脂，兔血漿，氧化酶紙片，乙基紫疊氮鈉葡萄糖肉湯（(EVB）

流程同上，只不過沒有使用魚制品，直接接種在營養(yǎng)肉湯中。另TSA平板不是四等分，而是五等分，分別接種標(biāo)準(zhǔn)菌株。

觀察結(jié)果如下：

HiDtect方法，基本相符

傳統(tǒng)培養(yǎng)基的方法

HiDtect定量方法的培養(yǎng)反應(yīng)

傳統(tǒng)培養(yǎng)基定量方法的培養(yǎng)反應(yīng)

結(jié)論：

快速鑒定紙DT001可用于快速鑒定下列菌：大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌，DT010鑒定紙能對(duì)食品病原菌快速可靠的檢測(cè)，在35-37℃孵育1-4小時(shí)內(nèi)可顯示出顏色變化。

-------------------------------------------------------------------------------------------------------

DT002  沙門氏菌快速鑒定紙

使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株包括：

大腸埃希氏菌——ATCC 9132

鼠傷寒沙門氏菌——ATCC 23564

腸炎沙門氏菌——ATCC 13076

使用的培養(yǎng)基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂，XLD瓊脂

驗(yàn)證培養(yǎng)基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養(yǎng)基，西蒙檸檬酸鹽瓊脂，尿素瓊脂

采用的樣品是肉

流程同上。標(biāo)準(zhǔn)菌株也接種到樣本肉上，之后進(jìn)行增菌和稀釋。取樣是0.1ml。TSA是分成3個(gè)象限。

結(jié)果如下：

HiDtect方法：

傳統(tǒng)培養(yǎng)基方法的培養(yǎng)反應(yīng)：

傳統(tǒng)培養(yǎng)基的定量結(jié)果

HiDtect方法的定量結(jié)果

結(jié)論：快速鑒定紙DT002可用于快速鑒定下列菌：鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌。DT002鑒定紙能對(duì)食品病原菌快速可靠的檢測(cè)，在35-37℃孵育1-4小時(shí)內(nèi)可顯示出顏色變化。

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------

DT008  大腸埃希氏菌雙驗(yàn)證的快速鑒定紙

使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株包括：

大腸埃希氏菌——ATCC 9132

金黃色葡萄球菌——ATCC25923

培養(yǎng)基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂，Baird Parker瓊脂

驗(yàn)證培養(yǎng)基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養(yǎng)基，西蒙檸檬酸鹽瓊脂，兔血漿

參照樣品：飲用水

將標(biāo)準(zhǔn)菌株也接種到水樣中。TSA平板分成2個(gè)象限。其余流程同上。

結(jié)果觀察：

HiDtect方法

傳統(tǒng)培養(yǎng)基方法

傳統(tǒng)培養(yǎng)基的定量結(jié)果

HiDtect方法的定量結(jié)果

結(jié)論：快速鑒定紙DT008對(duì)大腸埃希氏菌進(jìn)行了檢測(cè)。DT002鑒定紙能對(duì)食品病原菌作快速可靠的檢測(cè)，在35-37℃孵育1-4小時(shí)內(nèi)可顯示出顏色變化。

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------

DT011  芽孢桿菌快速鑒定紙

使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株包括：

蠟樣芽胞桿菌——ATCC 10876

枯草芽孢桿菌——ATCC 6633

蘇云金芽孢桿菌——ATCC 10792

培養(yǎng)基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養(yǎng)基：MYP瓊脂

驗(yàn)證培養(yǎng)基：葡萄糖瓊脂

參照樣品：

即食食品（大米）

將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到即食大米中，TSA平板分為3個(gè)象限，其余同上。

結(jié)果觀察：

HiDtect
方法

傳統(tǒng)培養(yǎng)基方法

傳統(tǒng)培養(yǎng)基方法的培養(yǎng)反應(yīng)（定量）

HiDtect方法的培養(yǎng)反應(yīng)（定量）

結(jié)論：

快速鑒定紙DT011對(duì)下列菌進(jìn)行了測(cè)試：蠟樣芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌。DT011鑒定紙能對(duì)這些食品病原菌作快速可靠的檢測(cè)，在35-37℃孵育1-4小時(shí)內(nèi)可顯示出顏色變化。