單增李斯特菌檢測方法的改進

在熟肉制品，即食生肉制品、干酪、再制干酪以及飼料中，常需檢查單增李斯特菌的存在，因為這些地方也是。李斯特菌屬有七個菌種，其中單增李斯特菌為致病菌，和人類關系最為密切。但單增李斯特菌的檢驗較為費時，前期增菌、分離外，后期還要做鑒定。目前，李斯特菌顯色培養基已得到普遍應用，并發現優于PALCAM平板，因為后者無法區分是單增李斯特菌與英諾克李斯特菌，但前者可以。但目前市面上大多數的李斯特菌顯色培養基也存在不足，它在分離鑒別出單增李斯特菌的同時，無法區分出單增李斯特菌與伊氏李斯特菌，也就是說，二者菌落形態均完全相同。

實際在檢測單增李斯特菌的過程中，曾有新疆疾控中心的人員發現，單增李斯特氏菌與伊氏李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌誤判現象突出2。這三種常易混淆的李斯特菌在葡萄糖、麥芽糖、MR-VP、甘露醇、七葉苷方面的生化反應均一致，溶血反應可區分英諾克與單增。木糖、鼠李糖反應可區分伊氏與單增。但溶血反應對操作技巧要求較高，同時，木糖、鼠李糖反應也包括在生化鑒定試劑條中，容易導致重復操作，比較耗時。而要進行生化試劑條的鑒定，還需挑菌落后進行純培養。

在這里，筆者給出一些不同的方案，可省卻后續復雜的鑒定步驟，供有關人員參考。一是在二次增菌后，直接使用一款單增李斯特菌驗證培養基（HiMedia生產，貨號MV1552）來分離鑒別。該培養基是依據磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C（PIPLC）活性和α-甲基-D-甘露糖苷的發酵。磷脂酶C是一種重要的毒力因子，只有單核細胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌具有。單增和伊氏李斯特菌水解培養基中的底物，菌落周圍產生不透明的光暈。單增和伊氏的鑒別是通過α-甲基-D-甘露糖苷的發酵。單增為陽性，菌落有黃色光暈。伊氏則為陰性。該培養基含有鼠李糖，酚紅為指示劑。其培養反應如下：

圖中標號分別為1. 單核細胞增生李斯特氏菌、2. 伊氏李斯特菌、3. 英諾克李斯特菌、4. 斯氏李斯特氏菌

第二個方案是采用國標推薦的李斯特菌顯色培養基（可使用HiMedia生產的，貨號MV1540，符合國標的標準，質量可靠，價格低于同類進口產品，可降低檢測成本），培養反應如下：

但該類顯色培養基無法區分單增與伊氏李斯特菌，進一步鑒別可直接使用李斯特菌生化鑒定試劑盒（內含12種生化反應，HiMedia生產，貨號KB0012A）。該試劑盒已包含木糖和鼠李糖的發酵反應。產品外形如下圖：

如不想用生化鑒定試劑盒，可用另一款改良型李斯特菌顯色瓊脂（貨號M1417），它可區分單增與伊氏李斯特菌，如下圖：

35-37°C 培養24-48小時后，單增李斯特菌（左）——藍綠色菌落，帶黃色光暈。伊氏李斯特菌（右）——藍綠色菌落，無黃色光暈。但要注意，這款顯色培養基無法區分單增與英諾克李斯特菌。如果使用一款顯色培養基同時區分單增、伊氏和英諾克，還可采用單增李斯特菌快速鑒別瓊脂（貨號M1924）。其培養反應如下圖所示：

其具體菌落特征如下：

參考文獻

1. 蘇靜  于烽  劉艷  遠雪梅  馬鑫. 單增李斯特氏菌國家標準檢驗方法的驗證與探討. 疾病預防控制通報. 2015-06-24