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最新2017年版ISO 22964克羅諾桿菌屬檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)解讀2019-04-24 13:19來(lái)源:締一生物
阪崎克羅諾桿菌名稱經(jīng)歷了數(shù)次變化。最早因產(chǎn)生黃色素,被稱為黃色陰溝腸桿菌。后來(lái)發(fā)現(xiàn)該菌與陰溝腸桿菌有所不同,又更名為“阪崎腸桿菌”。 2008年,Iversen等人通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)(如多位點(diǎn)序列分型即MLST)鑒定,將該菌擴(kuò)大為屬(克羅諾桿菌屬)。目前,克羅諾桿菌至少有7個(gè)種。其中阪崎克羅諾桿菌與人的關(guān)系最為密切。 克羅諾桿菌耐干燥環(huán)境,可在嬰幼兒奶粉、豆粉、營(yíng)養(yǎng)粉、草本茶、淀粉中存活,在海水中也存在。有報(bào)道,在海產(chǎn)干制品中的檢出率可達(dá)17.83%。又有人在成都市某城區(qū)超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、食品小吃店中調(diào)查,發(fā)現(xiàn)100份食品樣品中有32份樣品分離出克羅諾桿菌,分離率為32%。 克羅諾桿菌耐高溫,耐紫外線,能產(chǎn)生生物膜對(duì)消毒產(chǎn)生抵抗。同時(shí),阪崎克羅諾桿菌對(duì)嬰幼兒的感染致死率高,因此,在嬰幼兒食品和乳品中進(jìn)行檢測(cè)非常重要,我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)在這方面也有規(guī)定。 ISO/TS 22964:2017是國(guó)際上最新發(fā)布的一版克羅諾桿菌屬檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),它取代了2006年版。主要變動(dòng)是:將檢測(cè)范圍從阪崎克羅諾桿菌擴(kuò)大至整個(gè)克羅諾桿菌屬,樣本包括人類(lèi)食品、動(dòng)物飼料和食品生產(chǎn)區(qū)的環(huán)境樣本;mLST肉湯被克羅諾桿菌選擇性肉湯(CSB)所取代;阪崎腸桿菌分離瓊脂被克羅諾桿菌分離顯色瓊脂(CCI)所取代;生化驗(yàn)證試驗(yàn)有修正。 ISO/TS 22964:2017制訂的克羅諾桿菌屬檢測(cè)過(guò)程大致為:1. 預(yù)增菌。取樣,在緩沖蛋白胨水(BPW)中34℃-38℃培養(yǎng)18h±2h;2. 增菌。轉(zhuǎn)移0.1ml預(yù)增菌液至10ml CSB,混勻。41.5℃培養(yǎng)24h±2h。3.接種。用接種環(huán)接種10ul菌液至克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基(CCI)平板上,41.5℃培養(yǎng)24h±2h。4.挑出典型菌落,在TSA上純培養(yǎng)并進(jìn)行生化驗(yàn)證。 CCI平板上典型的克羅諾菌落為小至中等大小(1mm~3mm)藍(lán)色或藍(lán)綠色菌落。非克羅諾菌落則為白色,或白色同時(shí)中心為綠色或灰色、黑色。有些非克羅諾菌為黃色或紅色。 常見(jiàn)的生化驗(yàn)證包括氧化酶、賴氨酸脫羧、鳥(niǎo)氨酸脫羧、四種糖發(fā)酵產(chǎn)酸(阿拉伯糖、山梨醇、蔗糖)、4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷的水解。其他如伏普、甲基紅試驗(yàn)等為可選。克羅諾桿菌屬為氧化酶反應(yīng)陰性,葡吡喃糖苷的水解和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸陽(yáng)性,而賴氨酸脫羧和山梨醇產(chǎn)酸均為陰性。 關(guān)于克羅諾桿菌選擇性肉湯(CSB),微生物產(chǎn)品供應(yīng)商HiMedia公司提供有商品化脫水培養(yǎng)基Cronobacter Screening Broth(貨號(hào)M1786),1升中加入1管萬(wàn)古霉素(貨號(hào)FD233)制備為完全培養(yǎng)基。HiMedia公司也提供有克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基(CCI),其組成和ISO/TS 22964:2017完全一致,貨號(hào)為M2062I。同時(shí),HiMedia公司也提供有4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷,貨號(hào)為RM10294-1G,歡迎選購(gòu)。 圖. 克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基(CCI, 貨號(hào)為M2062I) 在ISO/TS 22964:2017的附錄3中,還列表列舉了阪崎克羅諾桿菌與其他相似菌的鑒別特征。表中的數(shù)字代表者陽(yáng)性菌株的比例。其中阪崎克羅諾桿菌與陰溝腸桿菌的區(qū)別在于:4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷水解試驗(yàn),阪崎克羅諾桿菌(+),陰溝腸桿菌(基本-);山梨醇發(fā)酵,阪崎克羅諾桿菌(-),而陰溝腸桿菌(+),可供檢測(cè)人員參考。 |