Vero細胞的培養(yǎng)方式

Vero細胞是世界衛(wèi)生組織和中國生物制品規(guī)程認可的病毒疫苗生產(chǎn)細胞系 。采用 V ero 細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的病毒疫苗主要包括狂犬病疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、流感疫苗、乙型腦炎疫苗、出血熱疫苗和手足口病疫苗等。Vero細胞有貼壁特性，很大程度上決定了病毒疫苗的生產(chǎn)是通過Vero細胞的微載體固定化培養(yǎng)而得以實現(xiàn)。

軍科院生物工程所曾比較了四種商品化微載體對Vero細胞生長的影響。他們先取適量的微載體，然后用PBS浸泡過夜，再吸出PBS，用PBS清洗3次，再高壓消毒后，加入含1%新生牛血清的DMEM/F12，放置在37℃培養(yǎng)箱備用。

Vero細胞則按2X105細胞/ml接種培養(yǎng)瓶和轉(zhuǎn)瓶，再加入含1%新生牛血清的DMEM/F12，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。需要時進行傳代。之后將該細胞作為種子細胞。

然后將固定質(zhì)量的4種微載體分別移入250mlBellco攪拌式細胞培養(yǎng)瓶。Vero細胞接種后，補足培養(yǎng)基至100ml，設(shè)置攪拌速度為30r/min懸浮培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基顏色在必要時更換新鮮培養(yǎng)基。

研究人員用顯微鏡觀察細胞形態(tài)，并取1ml細胞懸液進行細胞計數(shù)以測定Vero細胞密度和活力（儀器采用細胞密度和活力自動分析儀），采用多參數(shù)生物分析系統(tǒng)定量檢測細胞培養(yǎng)上清中的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺濃度，因而可測算葡萄糖比消耗速率，乳酸比生產(chǎn)速率等。

微載體固定化培養(yǎng)被廣泛應(yīng)用于病毒疫苗和重組蛋白藥物生產(chǎn)。結(jié)果顯示，在四種商品化微載體中，Cytodex 1微載體（固體實心微球）效果較好，細胞密度高。同時細胞代謝速率在四種微載體中都很接近。研究者還指出，Vero細胞在接種后24h才基本完成貼壁階段。

在該次培養(yǎng)中，新生牛血清用量為1%，雖然用量較少，但仍不可缺少。上海威正翔禹生物公司進口的澳洲產(chǎn)Ausbian精制新生牛血清(γ照射)系新西蘭血源（來自新西蘭政府獸醫(yī)管理局監(jiān)管下的具有出口注冊證的正規(guī)屠宰場），GMP標準生產(chǎn)。

品名：Ausbian精制新生牛血清

貨號：WS500N

規(guī)格：500ml/瓶

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參考文獻

劉紅，等.   Vero細胞在不同微載體固定化培養(yǎng)中的生長和代謝. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2012, 12 (36): 7001-7006