礦泉水中產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢測

產(chǎn)氣莢膜梭菌為厭氧型革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢的桿狀菌，廣泛分布于環(huán)境，在人的腸道內(nèi)也有發(fā)現(xiàn)。在自然界的大量水體中，產(chǎn)氣莢膜梭菌也存在，產(chǎn)生芽孢，并對污水處理措施和極端溫度具有抵抗力。產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量與水污染程度有一定的相關(guān)關(guān)系，因而也被認定是反映水質(zhì)的一種指示菌。我國《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》GB8538—2016規(guī)定，天然礦泉水產(chǎn)品和水源水需檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌。在該國標中，指定的分離培養(yǎng)基為亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂（簡稱SPS），但早有文獻報道，用該培養(yǎng)基經(jīng)24h厭氧培養(yǎng)后產(chǎn)氣莢膜梭菌的黑色菌落產(chǎn)生不明顯，容易產(chǎn)生漏檢1。

國際上推薦的還有一款分離培養(yǎng)基為M-CP培養(yǎng)基。M-CP培養(yǎng)基最初是由Bisson 和Cabelli兩個微生物學(xué)家描述的，用于快速鑒定海水、飲用水和污水中的產(chǎn)氣莢膜梭菌2。它被歐洲理事會指令98/83/EC中推薦用于人飲用水的水質(zhì)檢測，方法為膜過濾法3。

HiMedia生產(chǎn)的一款梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基（貨號M1354）即M-CP培養(yǎng)基。M是膜過濾法的英文**個字母，CP是產(chǎn)氣莢膜梭菌的英文簡稱。它用于水質(zhì)微生物檢測中，產(chǎn)氣莢膜梭菌的快速分離和初步鑒定。該培養(yǎng)基對于產(chǎn)氣莢膜梭菌具有更好的回收率，可用于監(jiān)測各種類型的水體，包括氯消毒過的水、工業(yè)廢水等。

培養(yǎng)基中的L-鹽酸半胱氨酸為還原劑，溴甲酚紫為pH指示劑。培養(yǎng)基中的吲哚β-D-葡萄糖苷為顯色底物，而二磷酸酚酞用于檢測酸性磷酸化酶。添加的D-環(huán)絲氨酸和多粘菌素B（FD153）抑制伴隨的其他菌群。用該培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)44 ± 1°C，21 ± 3小時即可觀察結(jié)果。當黃色菌落在暴露于氨煙30秒后變?yōu)槊倒寮t時，即可認為是產(chǎn)氣莢膜梭菌。還可挑取典型菌落和非典型菌落（綠色或未變色菌落）進行進一步的驗證。

M-CP培養(yǎng)基中所用的顯色劑吲哚β-D-葡萄糖苷濃度后來進行調(diào)整，濃度降低為60mg/L而不影響其靈敏度 4，這使得整個培養(yǎng)基的價格下降，因而能普遍使用。

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參考文獻

1. 潘寶怡，等. 飲用天然礦泉水中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢測國標方法的改進. 現(xiàn)代食品科技.2012,28(9):1236

2. Bisson, J.W., and Cabelli, V.J., 1979, Membrane filter enumeration method for Clostridium perfringens: Applied and Environmental Microbiology, v. 37. ****. p. 55-66

3. E.U. (1998) 98/83/EC of Council of 3rd of November 1998 on the quality of water intended for human consumption. Off. J. Eur. Commun., L330, 32-54

4. Armon, R., and Payment, P., 1988, A modified m-CP medium for enumerating Clostridium perfringens from water samples: Canadian Journal of Microbiology, v.34. p.78-79.