顯色培養基在臨床微生物學上的應用（上）

介紹

病理標本中致病菌的傳統檢測通常是接種一種或多種通用培養基如血平板。它可廣泛長菌，可疑的病原體可通過它的菌落外觀（例如，顏色，形態，溶血反應）進行檢測。但這種檢測是模糊的，它還需生化檢查和/或血清學試驗進行鑒定。而且它還需檢測共生菌。如皮膚感染的檢查中，需要檢測其他葡萄球菌以確定是否最終是金黃色葡萄球菌導致。沙門氏菌屬是胃腸炎的常見原因，檢查時需要分離來自糞便樣品的病原體。傳統上使用含乳糖和pH指示劑的培養基以使沙門氏菌（非發酵菌）與共生菌如大腸桿菌區分開來。但是，在確診沙門氏菌之前，它常常需要篩查許多其他不發酵乳糖的共生菌（如變形桿菌）。而采用血清學試劑或生化試劑進行篩查，不僅是費時的，而且成本也較高。

在過去的20年中，一系列針對目標致病菌的顯色培養基開發出來，并具有高度的特異性。它使目標致病菌形成有色菌落，從而與其他共生菌很容易區分開來。理想情況下，共生細菌應被完全抑制或形成無色菌落，從而使目標菌凸顯出來。

但這種情況很少見。通常加入第二種專屬酶的顯色劑，使共生菌產生另外一種顏色，或者兩種顏色產生疊加，從而區分共生菌和目標菌。

顯色培養基的設計，主要為了減少篩查共生菌，從而節省時間和試劑。顯色培養基也可以增加靈敏度，因為帶顏色的菌落可以更容易被檢測到。下面回顧一下常見的幾款醫學用顯色培養基。

尿道病原菌的檢測

1979年，Kilian和Bülow描述了一種采用β-葡萄糖醛酸酶底物的顯色培養基，可以直接檢測泌尿系統共生的病原菌。在一項納入的9247份尿液樣本的大型研究中，作者報告：94％大腸桿菌菌株可以只通過其菌落顏色就可鑒定，而不存在大腸桿菌菌株被鑒定錯誤。與傳統培養基（血瓊脂和麥康凱瓊脂）相比，作者報告說，培養基的成本降低了46％，處理樣本的時間縮短了67％。在分離出的菌落中，大腸桿菌占大多數（58％），其他腸桿菌科占24％，腸球菌占11％。也經常被隔離。顯色培養基對于尿培養過程中，在勞動時間減少和使用試劑減少這兩方面，其益處得到了證實。

正如上所述，在尿液樣本容易遇到的腸桿菌科中，大腸桿菌是惟一的β-葡萄糖醛酸酶的產生菌。另一款培養基除了采用β-葡萄糖醛酸酶底物外，還采用了β-葡萄糖苷酶的底物，以針對腸球菌、克雷伯菌/腸桿菌屬/沙雷菌，以及采用了色氨酸以檢測色氨酸脫氨酶。該酶存在于變形桿菌、普羅威登斯菌和摩根氏菌中。顯色培養基可直接鑒定常見的尿道病原菌，而無須進行費力的確證試驗。β-半乳糖苷酶底物也可以用于檢測大腸桿菌，但其特異性降低，因為容易將弗氏檸檬酸桿菌錯誤鑒定為大腸桿菌，這是需要增加生化試驗（如吲哚試驗）以進一步證實。

在與傳統培養基比較時，顯色培養基尤其在鑒別混合菌群時占有優勢。另有一些補充試驗推薦在顯色培養基使用后進行，包括吲哚試驗、吡咯烷酮肽酶試驗、脲酶試驗、賴氨酸或鳥氨酸脫羧試驗。它們用于增加大腸桿菌鑒定的特異性，或在顯色培養基的幫助下，拓廣可鑒定的菌種范圍。

圖. HiMedia尿道病原菌顯色培養基（貨號：MV1353）

金黃色葡萄球菌的檢測

曾有人對2000個臨床樣本的檢查顯示，葡萄球菌顯色培養基的靈敏度為95.5％，它高于血瓊脂孵育24小時后的靈敏度（81.9％）（P <0.001）。葡萄球菌顯色培養基的特異性也高達97.4％。葡萄球菌顯色培養基還有一個優勢是顯著抑制腸球菌。

圖.HiMedia葡萄球菌顯色培養基（貨號：M1468）

MRSA的檢測

耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（MRSA）為院內病原菌，常導致社區獲得性感染。有報道指出，在一項666個樣本的檢查中，MRSA顯色培養基孵育24h后，靈敏度達到99%，特異性達到99.8%。

圖. HiMedia耐甲氧西林金葡菌顯色培養基(貨號：MV1674), 需添加劑甲氧西林（貨號FD229)和頭孢西丁(貨號FD259)

沙門氏菌的檢測

在沙門氏菌顯色培養基中，**出現的是Rambach瓊脂。它采用了β-半乳糖苷酶底物檢測大腸桿菌，使大腸桿菌顯藍色，而沙門氏菌顯紅色，因為它發酵丙二醇后產酸，從而使中性紅顯色。也有的顯色培養基中加入葡萄糖醛酸，它可被沙門氏菌屬發酵。也有的顯色培養基加入另一種顯色底物，即-半乳糖苷酶的顯色底物。

傳統培養基以乳糖是否發酵與硫化氫產生為基礎鑒別沙門氏菌。沙門氏菌顯色培養基與之比較，其特異性更高。在用亞硒酸鹽肉湯增菌后，沙門氏菌即占大多數，并可被顯色培養基所特異證實。

圖. HiMedia 沙門氏菌顯色培養基(貨號：MV1296)

參考文獻

J.D. Perry and A.M. Freydie`re. The application of chromogenic media in clinical microbiology.Journal of Applied Microbiology. 2007,103: 2046–205