顯色培養(yǎng)基在臨床微生物學(xué)上的應(yīng)用（下）

大腸桿菌O157的檢測

大腸桿菌O157：H7與人類的出血性腸炎和溶血性尿毒綜合征有關(guān)。盡管大規(guī)模爆發(fā)非常罕見，但癥狀卻很嚴(yán)重，甚至導(dǎo)致死亡。在英國，已推薦對所有腹瀉患者的糞便進(jìn)行O157的檢查。針對大腸桿菌O157的顯色培養(yǎng)基市面上已有好幾款，大部分基于相似的原理：依靠對山梨醇和/或鼠李糖的不發(fā)酵，以及缺少β-葡萄糖醛酸酶活性。這些生化標(biāo)志物，加上選擇因子，能幫助將大部分大腸桿菌O157菌株同非致病性大腸桿菌和其他共生菌區(qū)分開來。也有的顯色培養(yǎng)基使用第二種顯色底物（如或β半乳糖苷酶），以突出大腸桿菌O157的存在。

有人曾對大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基的性能進(jìn)行評估，發(fā)現(xiàn)它對識別大腸桿菌O157：H7的靈敏度和特異性很高，但對于許多其他產(chǎn)Vero毒素的大腸桿菌血清型，如大腸桿菌O26（該菌株產(chǎn)β-葡萄糖醛酸酶），則不夠可靠。要檢測所有產(chǎn)Vero毒素的大腸桿菌菌種，還需要采用另外的策略來證實(shí)糞便中毒素的存在，如免疫學(xué)技術(shù)或核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測毒素的基因。

圖. HiMedia大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基（貨號MV1575A）

酵母的檢測和鑒別

已有好幾種顯色培養(yǎng)基用于檢測酵母，這些顯色培養(yǎng)基和傳統(tǒng)培養(yǎng)基（如沙氏瓊脂）相比，被證明在鑒別酵母不同物種上具有更優(yōu)異的性能。這些顯色培養(yǎng)基的共同原理是納入了β氨基己糖苷酶，使得對于最常見的和具有臨床重要意義的白色念珠菌，能夠被鑒別和鑒定出來。

有人報道過，和傳統(tǒng)的芽管形成試驗(yàn)相比，以β氨基己糖苷酶活性檢測為基礎(chǔ)的顯色培養(yǎng)基，對白色念珠菌的檢測是靈敏的，更為特異的，較少主觀性，且更為快速。基于這個原因，加上成本分析，作者得出結(jié)論，分離酵母的顯色培養(yǎng)基比傳統(tǒng)培養(yǎng)基在經(jīng)濟(jì)上更有優(yōu)勢。

顯色培養(yǎng)基通常可將好幾種不同的念珠菌物種區(qū)分開來，但也存在一定局限。例如，臨床樣本中遇到的光滑念珠菌，缺乏特異性的顯色標(biāo)志物。另一個局限是難以區(qū)分都柏林念珠菌和白色念珠菌。它們都具有β氨基己糖苷酶活性。有人將Pal's的培養(yǎng)基與顯色培養(yǎng)基合并，它可以刺激都柏林念珠菌產(chǎn)生厚膜孢子，形成粗糙菌落，從而與白色念珠菌相區(qū)分。

也有人進(jìn)行補(bǔ)充的生化試驗(yàn)或血清學(xué)試驗(yàn)，以輔助顯色培養(yǎng)基。例如，乳膠凝集試驗(yàn)可用于特異性的鑒定克柔念珠菌和都柏林念珠菌的菌落。海藻糖吸收試驗(yàn)也可快速鑒定光滑念珠菌。

圖. HiMedia念珠菌顯色培養(yǎng)基（左：貨號M1297A；右：貨號M1297AR）

無乳鏈球菌的檢測

無乳鏈球菌（B族鏈球菌）是一種可導(dǎo)致新生兒死亡的感染性疾病病因。一些國家推薦對于孕婦的陰道拭子進(jìn)行這種病原體的常規(guī)篩查。B族鏈球菌顯色培養(yǎng)基可用于檢測無乳鏈球菌。在一項(xiàng)對134個陰道拭子B族鏈球菌進(jìn)行檢測的研究中，顯色培養(yǎng)基表現(xiàn)出比血平板更高的特異性和靈敏度。在一項(xiàng)有737個樣本的大型研究中，有人報道了B族鏈球菌顯色培養(yǎng)基比Granada培養(yǎng)基或選擇性血平板具有更高的靈敏度。在孵育48h后，它使菌株的回收率增加，作者還強(qiáng)調(diào)在分離之前，應(yīng)使用選擇性增菌肉湯。

圖.HiMedia的B族鏈球菌顯色培養(yǎng)基（貨號：M1966）。菌落為無乳鏈球菌菌落。

結(jié)論和展望

在許多研究中，顯色培養(yǎng)基被證實(shí)其對傳統(tǒng)培養(yǎng)基所具有的優(yōu)勢，即更出色的檢測率，及對混合菌群的鑒別能力。包含顯色底物的顯色培養(yǎng)基價格毫無疑問地要比傳統(tǒng)培養(yǎng)基高，但它可被與可疑菌株驗(yàn)證和平板制備相關(guān)的試劑消耗和勞動時間的減少所抵消。

由于這些因素，在診斷實(shí)驗(yàn)室中顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用越來越普遍。很可能在未來幾年內(nèi)，針對更多病原體的顯色培養(yǎng)基會被開發(fā)出來。針對食品中弧菌和彎曲菌的顯色培養(yǎng)基，也在被評估用于臨床診斷。對MRSA等耐藥菌篩查的顯色培養(yǎng)基則進(jìn)一步推動了針對其他耐藥菌的顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用和開發(fā)。幾乎所有商用顯色培養(yǎng)基都依賴于檢測糖苷酶、磷酸酶或酯酶活性。大多數(shù)細(xì)菌病原體產(chǎn)生豐富的肽酶，但這些肽酶到目前為止仍未開發(fā)。對這些酶活性的識別和適當(dāng)顯色底物的設(shè)計，將使得針對其他致病菌（例如軍團(tuán)菌）的更多顯色培養(yǎng)基的開發(fā)成為可能。

參考文獻(xiàn)

J.D. Perry and A.M. Freydie`re. The application of chromogenic media in clinical microbiology.Journal of Applied Microbiology. 2007,103: 2046–205

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