食品單增李斯特菌的特異性檢測

李斯特菌為革蘭氏陽性菌，包含有6種，但只有單核細胞增生李斯特菌導致人類疾病（具有高致死率），而伊氏李斯特菌只與其他哺乳動物疾病相關。

單核細胞增生李斯特菌已在食品、環境和臨床樣本中被發現。其檢測方法為培養法，在我國食品安全國標中有詳細的描述。該方法靈敏度高，堪稱為金標準。從樣本收集開始，對于陰性結果的得出，通常需要3-4天，陽性結果通常需要5-7天。對于食品企業，則希望檢測結果能更快出來。

食品單核細胞增生李斯特菌的檢測，受到如下這幾個因素的影響：即競爭菌群的干擾、目標菌滴度較低，以及食品成分所帶來的抑制和干擾。因此，以抗體和分子手段為基礎的方法也開發出來，大部分具有同等的靈敏度，但更快，同時在48h內能完成檢測。

然而，在選擇方法時要注意，大部分檢測方法無法區分不同的李斯特菌物種。在不同的李斯特菌物種中，只有單增李斯特菌是人類的病原菌，因此需要采用物種特異的方法。同時，也應注意，并不是所有的單增李斯特菌菌株都導致人類疾病。在13種單增李斯特菌的血清型中，只有3種即1/2a，1/2b和4b導致90%以上的人類病例。

表1.實驗室鑒別單增李斯特菌的主要試驗

在傳統培養法中，**步是增菌。增菌的作用是提高分離的靈敏度，使得25g食品樣品中即使有1個李斯特菌也能被檢測出來。該增菌過程是選擇性的，即抑制無關菌群生長。其選擇因子包括吖啶黃（抑制革蘭氏陽性菌生長）、萘啶酸（抑制革蘭氏陰性菌）和放線菌酮（一種真核生物蛋白抑制劑，用于抑制真菌生長）。其他抗生素包括頭孢他啶和拉氧頭孢和氯化鋰。李斯特菌分離培養基有的還有七葉苷，因為李斯特菌屬具有使七葉苷水解的特征反應。

顯色培養基提供了一種簡便的分離鑒定李斯特菌和單增李斯特菌的方法。它主要根據李斯特菌所含有的特異酶以及特定的糖發酵反應來進行的。通過采用李斯特菌顯色培養基，單增李斯特菌有可能在24h后得到初步鑒定，而之前的Oxford培養基等傳統型培養法則需要3-4天。顯色培養基也適合大部分的食品類型。

毒力基因plcA，在單增李斯特、伊氏李斯特和斯氏李斯特菌中均存在，它編碼磷脂酰肌醇磷脂酶C（PIPL-C），它常用于鑒別溶血性李斯特菌和非溶血性李斯特菌。L--磷脂酰肌醇（PI）被PIPL-C裂解產生不溶于水的脂肪酸，在溶血性李斯特菌菌落周圍形成不透明的白色暈環。它和β-D-葡萄糖苷酶一起，構成了ALOA李斯特菌分離顯色培養基的基礎（下圖）。在該培養基中，只有單增與伊氏李斯特菌有白色暈環。

圖. HiMedia公司生產的李斯特菌顯色培養基（ALOA法）（貨號MV1540）

可疑菌落應進行鑒定，如革蘭氏陽性染色，無芽孢桿菌，過氧化氫酶陽性，氧化酶陰性，28℃存在動力，37℃不存在動力。

生化鑒定試劑盒可進一步鑒定李斯特菌的物種。HiMedia提供了2款李斯特菌物種生化鑒定試劑盒（貨號分別為KB012A，KBM003A，下圖）。鑒定卡上包含了12個迷你生化反應，囊括了經典的生化鑒定試驗。KBM003A多出動力學鑒定試驗。

HiMedia公司生產的HiBio-ID菌種生化鑒定試劑盒

致病李斯特菌和非致病李斯特菌可通過它們的溶血反應或PIPL-C活性來鑒別。溶血反應是鑒別單增李斯特（溶血）和英諾克李斯特菌（不溶血）的常用試驗。PIPL-C活性則可通過顯色培養基檢測。木糖和鼠李糖發酵則可將單增李斯特與伊氏李斯特和斯氏李斯特區分開來，單增是木糖（—）鼠李糖（+），伊氏和斯氏是木糖（+）鼠李糖（-）。丙氨酸肽酶是所有李斯特物種具有、唯獨單增李斯特菌不具有的一種酶，也可用于物種鑒別。

對于其他檢測方法，為保證靈敏度，仍然需要增菌。免疫法檢測閾限較高，而核酸擴增法更為靈敏，但PCR反應容易被食品中的成分所抑制，并且不能區分活細胞和死細胞。增菌可以稀釋那些抑制成分，并且使檢測的核酸是來自生長的細胞。核酸法的特異性更強，并且速度也較快，并以qPCR定性為主。

在采用新檢測方法之前，有必要對方法進行驗證。在國際上，ISO和AOAC的標準可以參考。

HiMedia公司是國際知名微生物產品生產商，一直致力于微生物培養基和細胞培養基的研發和生產，其顯色培養基有80多種，涵蓋各個領域，包括無動物源成分及化學限定的，并具有WHO GMP認證、ISO9001：2008，ISO13485：2003認證，CE認證和FDA注冊登記。其產品行銷全球140多個國家。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養和檢測領域，一如既往地為您帶來優質的服務。如需詳細了解，可訪問公司官網：

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