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無(wú)血清培養(yǎng)基的開(kāi)發(fā)2019-09-09 09:57來(lái)源:威正翔禹|締一生物
要開(kāi)發(fā)無(wú)血清培養(yǎng)基,關(guān)鍵是找出血清中支持細(xì)胞生長(zhǎng)的所有成分。其必要性在于有些細(xì)胞非常挑剔,同時(shí)要注意不同細(xì)胞系的營(yíng)養(yǎng)需求差別較大。因此,不可能設(shè)計(jì)出一種適合所有細(xì)胞系的通用培養(yǎng)基。事實(shí)上,即使是同一細(xì)胞系,其內(nèi)部的不同克隆,營(yíng)養(yǎng)需求也存在差異。 無(wú)血清培養(yǎng)基存在如下幾種:化學(xué)限定培養(yǎng)基所有成分均知其化學(xué)結(jié)構(gòu),它可包含蛋白質(zhì)。無(wú)蛋白培養(yǎng)基則不包含大分子蛋白,其成分可能并非化學(xué)限定。無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基也可能不是化學(xué)限定的,它只是不包含動(dòng)物來(lái)源的成分。最理想的培養(yǎng)基是化學(xué)限定的無(wú)蛋白、無(wú)動(dòng)物源成分培養(yǎng)基。但經(jīng)常發(fā)現(xiàn),隨著成分限定性的增加,培養(yǎng)基的性能則不斷下降。 無(wú)血清培養(yǎng)基的開(kāi)發(fā)有從上至下法和從下至上法。從上至下法是為類(lèi)似細(xì)胞系選擇已知配方的培養(yǎng)基,添加血清,使細(xì)胞達(dá)到**生長(zhǎng)。再逐步減少血清,使細(xì)胞生長(zhǎng)速率降至原先的50%。這時(shí)再選擇性地加入某些成分,使細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)至原先水平。 該方法較為簡(jiǎn)易。屬于同一類(lèi)別的細(xì)胞系經(jīng)常需要同一生長(zhǎng)因子。因此,對(duì)一種上皮細(xì)胞系有效的配方對(duì)另一種上皮細(xì)胞系,可能只需做極小的調(diào)整。用該方法開(kāi)發(fā)配方較為容易。該過(guò)程也涉及細(xì)胞的馴化,其中細(xì)胞會(huì)自身合成一些必需組分。該方法的缺點(diǎn)是可能存在很多非必需成分,有些成分還會(huì)抑制生長(zhǎng)。 另一種方法是從下至上法。它系統(tǒng)加入可能促生長(zhǎng)的組分,使細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸升高。這樣只有生長(zhǎng)必需的成分才會(huì)留在配方內(nèi)。用該方法開(kāi)發(fā)的培養(yǎng)基能使細(xì)胞具有更高的生長(zhǎng)速率,并且更容易獲得改進(jìn)。 圖. 確定一個(gè)成分的**濃度 此外,統(tǒng)計(jì)法也常用于無(wú)血清配方的開(kāi)發(fā)。 目前已知取代血清的能夠促細(xì)胞分裂的成分有:蛋白水解物(動(dòng)物蛋白、植物蛋白或菌體蛋白)、胰島素和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)鐵蛋白、黏附因子等。 在蛋白水解物中,酵母、大豆、小麥、棉花、豌豆水解物已經(jīng)廣泛使用。但水解物成分較為復(fù)雜,有人用HPLC和質(zhì)譜分析大豆水解物410種成分中,253種為多肽。要實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的**生長(zhǎng),常非單一使用水解物,而需要多種組分的搭配。同時(shí),同一水解物批次之間存在一定的組成差異,用NMR指紋圖譜可進(jìn)行批間一致性和產(chǎn)品質(zhì)量的預(yù)測(cè)。 胰島素是5.7KD的多肽,許多細(xì)胞需要。它可刺激細(xì)胞DNA的合成。目前,有重組胰島素可添加至無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基配方中。IGF與胰島素接近,但促細(xì)胞分裂活性更強(qiáng)。 總之,目前已有商品化的無(wú)血清培養(yǎng)基,可用于細(xì)胞無(wú)血清或無(wú)動(dòng)物源環(huán)境的培養(yǎng),只是其配方大多保密。 在最近新出的無(wú)血清培養(yǎng)基產(chǎn)品中,HiMedia公司開(kāi)發(fā)的CELLin1TM值得關(guān)注。它是一款化學(xué)限定的無(wú)動(dòng)物源成分的病毒生產(chǎn)用培養(yǎng)基,主要適合腎細(xì)胞系如Vero細(xì)胞系、MDBK細(xì)胞系、MDCK細(xì)胞系、PK-15細(xì)胞系和人胚肺二倍體MRC-5細(xì)胞系。以MDCK細(xì)胞系為例,初始接種密度為0.3-0.5×106個(gè)細(xì)胞/ ml,培養(yǎng)48~72小時(shí)后,細(xì)胞密度可達(dá)約3.1×106個(gè)細(xì)胞/ ml,流感病毒A的滴度可達(dá)約5.0 log10TCID50。細(xì)胞可穩(wěn)定傳代,密度可保持在3.0~3.4×106個(gè)細(xì)胞/ ml,保證種子細(xì)胞的制備。如需了解更多詳情,可電話(huà)咨詢(xún):400-166-8600 |