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新型『無(wú)動(dòng)物源』細(xì)胞培養(yǎng)基,疫苗生產(chǎn)專(zhuān)用2019-09-09 10:18來(lái)源:威正翔禹|締一生物
在生物制藥領(lǐng)域,動(dòng)物源原料存在安全風(fēng)險(xiǎn),針對(duì)此風(fēng)險(xiǎn),國(guó)際各大藥典制定了相關(guān)規(guī)范: 如《歐洲藥典》(EP8.0,2014)第5.2.8章強(qiáng)調(diào)了醫(yī)用產(chǎn)品的生產(chǎn)應(yīng)優(yōu)先考慮使用“非TSE相關(guān)動(dòng)物物種材料”或“無(wú)動(dòng)物源材料”,使安全風(fēng)險(xiǎn)最低化。 《美國(guó)藥典》也明確規(guī)定,為減少TSE傳播的潛在風(fēng)險(xiǎn),建議使用無(wú)動(dòng)物源生產(chǎn)原料代替動(dòng)物源原料。 在疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域,無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基的使用不僅可以使安全風(fēng)險(xiǎn)最小化,而且存在諸多優(yōu)點(diǎn)。 疫苗生產(chǎn)用『無(wú)動(dòng)物源』培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn) 生產(chǎn)疫苗使用的動(dòng)物源細(xì)胞培養(yǎng)基,具有潛在的安全風(fēng)險(xiǎn),且存在批間差異,審批手續(xù)繁瑣等問(wèn)題。 而無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基有著極大地優(yōu)越性: 1.無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基完全避免了因原材料導(dǎo)致接種者感染外源病毒的風(fēng)險(xiǎn) 2.防止了動(dòng)物源原料帶來(lái)的病毒干擾目標(biāo)病毒 3.無(wú)血清的配方,使細(xì)胞懸浮培養(yǎng)更容易,減少細(xì)胞成團(tuán),利于疫苗廠大規(guī)模懸浮培養(yǎng) 4.無(wú)動(dòng)物源配方,批間差異更小,利于工業(yè)化穩(wěn)定生產(chǎn) 5.原料無(wú)動(dòng)物源成份,使疫苗審批的申報(bào)流程更簡(jiǎn)便 6.無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基,在海關(guān)進(jìn)口時(shí),手續(xù)更簡(jiǎn)便,保證原料更快捷地能及時(shí)供應(yīng) 無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基已被全球疫苗生產(chǎn)廠家大量使用,其中一款Himedia公司研制的新型的CELLin1?培養(yǎng)基,更是因其應(yīng)用面廣,細(xì)胞培養(yǎng)效果佳,病毒產(chǎn)量大,而表現(xiàn)上佳。 CELLin1?培養(yǎng)基適用的疫苗品種范圍 CELLin1?適用于以下疫苗生產(chǎn)常用的5種細(xì)胞 CELLin1?作為一種 新型『無(wú)動(dòng)物源』培養(yǎng)基, 專(zhuān)門(mén)用于培養(yǎng)上述五種細(xì)胞, 且具有非常好的培養(yǎng)效果。 CELLin1?『病毒生產(chǎn)能力』和『促細(xì)胞生長(zhǎng)能力』 驗(yàn)證報(bào)告 1.實(shí)驗(yàn)信息 本實(shí)驗(yàn)使用CELLin1?無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基與競(jìng)品OptiPRO?SFM (Gibco)無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基分別培養(yǎng)細(xì)胞。 實(shí)驗(yàn)選用的細(xì)胞系: MDBK細(xì)胞,牛皰疹病毒1型(BHV-1) MDCK細(xì)胞,流感病毒A PK-15細(xì)胞,豬圓環(huán)病毒2型(PCV) Vero細(xì)胞,狂犬病毒 B.實(shí)驗(yàn)觀測(cè)指標(biāo) 1.病毒產(chǎn)生能力(96孔板內(nèi)進(jìn)行) 1.1生長(zhǎng)曲線(xiàn):檢測(cè)培養(yǎng)基維持細(xì)胞生長(zhǎng)和達(dá)到高細(xì)胞密度和高活力的能力 1.2病毒滴度:檢測(cè)培養(yǎng)基支持病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖的能力 2.種子制備和細(xì)胞存儲(chǔ) 宿主細(xì)胞系的存儲(chǔ)和種子制備是病毒疫苗生產(chǎn)前的2個(gè)主要步驟。通過(guò)連續(xù)傳代,檢測(cè)CELLin1?支持宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。 C.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 MDBK細(xì)胞 采用CELLin1?培養(yǎng)MDBK細(xì)胞, BHV1病毒滴度用TCID50 (108)表示(下圖)。 數(shù)據(jù)表明,CELLin1?培養(yǎng)的細(xì)胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量,CELLin1?培養(yǎng)的MDBK細(xì)胞更健康、更有活力,產(chǎn)毒能力更強(qiáng)。 MDBK細(xì)胞在T175培養(yǎng)瓶中, 用CELLin1?或競(jìng)品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。 當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代(下圖)。 CELLin1?連續(xù)五代培養(yǎng)的MDBK細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)高于競(jìng)品,而且細(xì)胞生長(zhǎng)更穩(wěn)定。 MDCK細(xì)胞 采用CELLin1?培養(yǎng)MDCK細(xì)胞, 流感病毒A滴度用TCID50 (108)表示(下圖)。 數(shù)據(jù)表明,CELLin1?培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞產(chǎn)毒能力更強(qiáng)。 連續(xù)五代培養(yǎng),CELLin1?培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)高于競(jìng)品,對(duì)細(xì)胞的支持非常穩(wěn)定。 PK-15細(xì)胞 采用CELLin1?培養(yǎng)PK-15細(xì)胞, 豬圓環(huán)病毒滴度用TCID50 (108)表示(下圖)。 數(shù)據(jù)表明,CELLin1培養(yǎng)基更適合PK-15細(xì)胞生長(zhǎng)。 PK-15細(xì)胞在T175培養(yǎng)瓶中, 用CELLin1?或競(jìng)品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。 當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代(下圖)。 連續(xù)五代培養(yǎng),CELLin1?培養(yǎng)的PK-15細(xì)胞數(shù)量均高于競(jìng)品,對(duì)細(xì)胞的支持非常穩(wěn)定。 Vero細(xì)胞 采用CELLin1?培養(yǎng)Vero細(xì)胞, 狂犬病毒滴度用TCID50(108) 表示(下圖)。 數(shù)據(jù)表明,CELLin1?培養(yǎng)的細(xì)胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量。CELLin1?培養(yǎng)的Vero細(xì)胞更健康、更有活力,產(chǎn)毒能力更強(qiáng)。 Vero細(xì)胞在T175培養(yǎng)瓶中, 用CELLin1?或競(jìng)品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。 當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代(下圖)。 通過(guò)連續(xù)五代培養(yǎng),與競(jìng)品的細(xì)胞密度對(duì)比,CELLin1?對(duì)Vero細(xì)胞的支持非常穩(wěn)定。 D. 結(jié)論 CELLin1?支持Vero、PK-15、MDCK、MDBK細(xì)胞生長(zhǎng)和病毒繁殖的能力已得到了驗(yàn)證。 在這些細(xì)胞系中,CELLin1?顯示出**的病毒生產(chǎn)能力和促細(xì)胞生長(zhǎng)能力。 因而,CELLin1?可有效的作為通用培養(yǎng)基用于Vero、PK-15、MDCK、MDBK細(xì)胞的病毒生產(chǎn)。 CELLin1?的配制方法 CELLin1?是一款化學(xué)限定的 疫苗生產(chǎn)用『無(wú)動(dòng)物源』培養(yǎng)基, 分為A、B兩個(gè)部分。 A部分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 呈白色至淺粉色均勻粉末,2-8 ℃避光保存。 B部分為生長(zhǎng)添加劑, 呈無(wú)色透明溶液,-20 ℃保存. 1L規(guī)格的CELLin1?配制步驟 取11.5g A部分用900ml組織培養(yǎng)級(jí)別水重懸,持續(xù)攪拌直至粉末完全溶解。不要加熱。 加入2.70g碳酸氫鈉粉末或36.0ml 7.5%碳酸氫鈉溶液配制1升培養(yǎng)基。攪拌至溶解。 加入584mg的L-谷氨酰胺粉末或加入20mL濃度為200mM的L-谷氨酰胺以制備1升培養(yǎng)基。攪拌至溶解。 用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH將pH調(diào)節(jié)至低于理想pH值0.2-0.3單位水平,因?yàn)閜H值在過(guò)濾后趨于上升。 用組織培養(yǎng)級(jí)別水將體積補(bǔ)足至1000ml。 立即用孔徑≤0.22μM濾器過(guò)濾培養(yǎng)基以滅菌。使用正壓而非真空抽濾,以減少CO2的丟失。 在2-8℃解凍生長(zhǎng)添加劑(B部分)。 在A部分和B部分放入生物安全柜之前,對(duì)兩部分瓶子表面噴灑異丙醇進(jìn)行消毒。 在無(wú)菌條件下將B部分全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移至1L基礎(chǔ)培養(yǎng)基(A部分)中,輕輕混合。 配置完全的培養(yǎng)基可直接使用。儲(chǔ)存時(shí),完全培養(yǎng)基在2-8℃下的保質(zhì)期為8周。 注:在使用過(guò)程中,還需要細(xì)胞的無(wú)血清馴化。 CELLin1?產(chǎn)品信息 品名:CELLin1?化學(xué)限定疫苗生產(chǎn)用無(wú)動(dòng)物源成分培養(yǎng)基 英文名:CELLin1? Chemically defined, Animal Component Free Virus Production medium 貨號(hào):SFM036AP 生產(chǎn)商:HiMedia Laboratories 生產(chǎn)地:印度 組成: A部分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,干粉,2-8℃保存 B部分為生長(zhǎng)添加劑,液體,-20 ℃保存 內(nèi)毒素含量:小于1EU/ml 市場(chǎng)價(jià): 1L/套 ¥950 10L/套 ¥8000 廠家介紹: HiMedia Laboratories公司是世界**的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家。HiMedia公司總部位于印度,50年致力于微生物培養(yǎng)基和細(xì)胞培養(yǎng)基的研發(fā)生產(chǎn),在制藥等工業(yè)生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用,其產(chǎn)品行銷(xiāo)全球140多個(gè)國(guó)家。尤其是HiMedia公司的非動(dòng)物源培養(yǎng)基,在國(guó)際上占絕對(duì)領(lǐng)先地位。 HiMedia公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基都具備 WHO GMP、ISO9001、 ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證 和CE、FDA注冊(cè)登記, 能更好地應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。 2019年,HiMedia公司的CELLin1?產(chǎn)品正式進(jìn)入中國(guó),由北京締一生物作為總代理。北京締一生物被中國(guó)生物界譽(yù)為值得“持續(xù)信賴(lài)的供貨商”,在細(xì)胞培養(yǎng)的工業(yè)化生產(chǎn)領(lǐng)域有著專(zhuān)業(yè)的技術(shù)背景,為國(guó)內(nèi)疫苗生產(chǎn)(如流感疫苗,禽流感疫苗,豬藍(lán)耳疫苗等)提供了有力的幫助和支持。 現(xiàn)今我們引入CELLin1?給科研人員和工業(yè)藥廠,希望能幫助藥廠進(jìn)一步發(fā)展,使我國(guó)疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域能邁上一個(gè)全新的高度! |