植物源TSB——無菌工藝模擬的理想選擇

無菌制劑的藥企至少每半年需要一次無菌工藝模擬（APS），又稱為培養基灌裝試驗（MFT），以保證生產線的無菌生產。以往APS多用胰酪大豆胨液體培養基（簡稱TSB）。但歐洲藥典EP 8.0-2014已提出非動物源材料的優先選擇原則，以避免動物源成分可能帶來的BSE/TSE風險。BSE/TSE發生率低，但在動物體內有潛伏期，沒有明顯癥狀，且一旦發現，影響巨大，故WHO、FDA與CE均有專章討論降低BSE/TSE發生風險的措施。我國近年發布的《無菌工藝模擬試驗指南（無菌制劑）》、《無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）》對此亦有提及：“包含動物來源成分的培養基，應考慮培養基引入外源污染的風險。如BSE（可傳染性海綿腦病）、TSE（瘋牛病）等風險”，并說“亦可使用植物來源的培養基”。（見《無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）》6.3.2.4條）

如植物源TSB性能與動物源TSB相符，且價格一致，則可不必考慮BSE/TSE等動物源成分帶來的外源因子風險問題。在性能方面，《指南》規定有“培養基促生長能力試驗”，所用標準測試菌株包括白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）（必要時）等。“還可考慮加入環境和無菌檢查中發現的典型微生物。促生長試驗接種量應小于100CFU。”

植物源TSB可采用濕熱滅菌和輻照滅菌，無論何種滅菌方式，均“應對滅菌過程進行驗證，輻照滅菌還需在產品質量報告中體現驗證中所用的菌種和劑量等信息”。

早在2007年，Journal of Microbiological Methods(微生物學方法期刊）就發表了美國ATCC參與的一項研究，表明在促生長能力方面，植物源TSB完全可以替代動物源TSB。菌株的表型會發生輕微的變化，但不影響菌株品系的遺傳學特征，即菌種鑒定不受影響。文中沒有提所用植物源TSB的品牌。

在推動植物源培養基應用方面，HiMedia公司走在世界前列，不僅將各種植物源培養基配方標準化，而且具有世界最多的植物源培養基品種，不少被載入2010年美國CPC學術出版社出版的第四版《微生物培養基手冊》。在APS的應用方面，HiMedia公司推出了一系列植物源TSB產品，具體如下：

1、植物源TSB（輻照），粉末型，貨號MV011G

2、植物源TSB（輻照），顆粒型，貨號GMV011G

3、植物源TSB（輻照），粉末型，含MTF指示劑，貨號MV2018G

4、化學限定TSB（輻照），粉末型，含MTF指示劑，貨號MCD2018G

值得一提的是，顆粒型和粉末型培養基相比，沒有揚塵和受潮的問題。TSB中添加MTF指示劑，可通過顏色變化顯著區分是否有菌，見下圖。化學限定TSB的好處是無批間差異。

HiMedia生產的植物源TSB（輻照，粉末型，貨號MV011G）經過嚴格而全面的質控，合格后方能出廠。HiMedia生產工藝也具有ISO9001、ISO13485、WHO-GMP質量體系認證，產品具有美國FDA注冊和歐盟IVDD注冊證書。

MV011G的部分質控項目包括：

注：以下方法均根據美國藥典和歐洲藥典的方法進行。

1、滅菌過程的驗證

包括無菌檢查（連續14天30-35℃培養未觀察到細菌生長，25-25℃培養未觀察到真菌生長）和支原體檢測（PCR）。該無菌檢查同時也進行有檢查過程的驗證，即培養基用標準菌株接種≤100cfu進行測試，細菌在20-25℃培養不超過3天，真菌不超過5天，以驗證如有如下菌種，則該培養基即能檢查出來（表現為旺盛生長）。具體所用菌株包括：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC8739、大腸桿菌ATCC25922、大腸桿菌NCTC9002、銅綠假單胞菌ATCC9027、銅綠假單胞菌ATCC27853、藤黃微球菌ATCC9341、阿博尼沙門氏菌NCTC6017、肺炎鏈球菌ATCC6305、枯草芽孢桿菌ATCC6633、鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028、金黃色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌（ATCC10231）、白色念珠菌（ATCC 2019）、巴西曲霉（ATCC 16404）。以上信息即回答了《指南》要求的“輻照滅菌還需在產品質量報告中體現驗證中所用的菌種和劑量等信息”。

2、培養基促生長能力試驗

菌株接種量≤100cfu，培養條件30-35°C 18-24小時。所用標準菌株有金黃色葡萄球菌ATCC 6538、金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸桿菌 ATCC 8739、大腸桿菌 ATCC 25922

大腸桿菌NCTC 9002、銅綠假單胞菌 ATCC 9027、銅綠假單胞菌ATCC 27853、枯草芽孢桿菌ATCC 6633、藤黃微球菌ATCC9341、鼠傷寒沙門氏菌ATCC 14028、阿博尼沙門氏菌NCTC6017、肺炎鏈球菌ATCC 6305。以上菌株即已包括《指南》提到的幾乎所有菌株，只是用的是ATCC來源的。對于《指南》提到的白色念珠菌（CMCC98001）和黑曲霉（CMCC98003），在滅菌驗證中測試過。只有《指南》提到的生孢梭菌（CMCC64941）沒有測試，指南提到是必要時才去測試，企業可自行測試。

3、穩定性檢查

這一點指南未作要求。HiMedia質控要求室溫下放置7天，仍為淡黃色溶液，無任何沉淀產生。

總之，HiMedia生產的植物源TSB系列產品能滿足《指南》的各種要求，能夠給藥企的APS提供便利，值得大力推廣。

締一生物作為HiMedia公司中國區總代理，在制藥和生命科學領域，一如既往地為您帶來優質的服務。咨詢電話：400-166-8600