反復(fù)凍融血清對細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)有影響嗎

如果實(shí)驗(yàn)短期內(nèi)用不完的血清反復(fù)凍融在一定程度上對血清內(nèi)的蛋白活性存在影響，從而影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，我們來看看反復(fù)凍融都有哪些影響。

曾有研究發(fā)現(xiàn)，血清凍融三次，對腫瘤標(biāo)志物的濃度影響不大1，對于血漿，有報(bào)道在短時(shí)間內(nèi)反復(fù)凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。最重要的是一篇西北民族學(xué)院的文章，《反復(fù)凍融新生牛血清對促細(xì)胞生長效應(yīng)的影響》，作者針對SP2/0細(xì)胞，用MEM培養(yǎng)基和三批新生牛血清進(jìn)行培養(yǎng)。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細(xì)胞生長曲線，根據(jù)公式t =T/A , A=log2
Y/X計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間（t 為細(xì)胞倍增時(shí)間， Y 為細(xì)胞峰值前1 d 的細(xì)胞數(shù)， X 為接種細(xì)胞數(shù)， T 為細(xì)胞生長時(shí)間）。結(jié)果顯示：選用的三批新生牛血清在反復(fù)凍融 28 次時(shí)， 血清促細(xì)胞生長的**增殖量變化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促細(xì)胞生長的倍增時(shí)間在反復(fù)凍融 20次時(shí)延長， 即血清促細(xì)胞繁殖一代所需的時(shí)間在凍融次數(shù)達(dá)到 20 次時(shí)顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結(jié)果列表，發(fā)現(xiàn)在凍融20次之前，細(xì)胞倍增時(shí)間延長2-3小時(shí)不等，20次時(shí)，則延長3-4小時(shí)。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒有對胎牛血清進(jìn)行測試。

　　國外有人對大鼠血清中的18種化學(xué)成分進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)反復(fù)凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內(nèi)。3

　　總而言之，如果能避免牛血清的反復(fù)凍融，及時(shí)分裝，那是最理想的。如果在短時(shí)間內(nèi)有幾次反復(fù)凍融，也不必過于擔(dān)心。但是，對于胎牛血清，還有一個(gè)問題，是反復(fù)凍融增高了血清產(chǎn)生沉淀或渾濁的風(fēng)險(xiǎn)。因?yàn)檠逶谌诨瘯r(shí)，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產(chǎn)生沉淀。同時(shí)，如果血清內(nèi)含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀4，等到血清再融化時(shí)，沉淀就顯現(xiàn)出來了。所以，血清的質(zhì)量也非常重要。