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淺談透析胎牛血清的作用

2020-04-28 09:53來(lái)源：威正翔禹|締一生物

胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng)，是細(xì)胞生長(zhǎng)天然的培養(yǎng)基，它為細(xì)胞提供激素、生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來(lái)促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。但是在一些特殊的研究中也會(huì)使用到透析胎牛血清，我們來(lái)了解下透析胎牛血清的作用。

900_500透析胎牛血清.png

透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個(gè)領(lǐng)域：蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞通訊以及報(bào)告基因細(xì)胞系的篩選，其中有些領(lǐng)域是相互交叉的。以下稍作舉例。


細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)（簡(jiǎn)稱SILAC）。

這是一項(xiàng)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì)，一般培養(yǎng)5-6代，細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析，即可比較經(jīng)過(guò)不同處理的細(xì)胞，其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細(xì)胞與病理狀態(tài)細(xì)胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細(xì)胞蛋白中的氨基酸均為標(biāo)記氨基酸（常采用賴氨酸或精氨酸）。


工程細(xì)胞株的篩選。

以常見(jiàn)的工程細(xì)胞株CHO-DFGRˉ為例，該細(xì)胞自身缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR），必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆。通過(guò)甲氨蝶呤（MTX）進(jìn)一步篩選，可進(jìn)一步得到能表達(dá)大量目的蛋白的細(xì)胞克隆。這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃嘌呤和胸腺嘧啶等，也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分，參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。


研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對(duì)某種類(lèi)型細(xì)胞增殖、分化的影響。

這時(shí)也需要用透析胎牛血清，以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。