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細胞培養(yǎng)都需要準備哪些

2020-05-06 10:54來源:威正翔禹|締一生物

做細胞培養(yǎng)前期都需要準備什么呢,今天我們就細數(shù)下我們要做的準備。

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1、選擇正確的培養(yǎng)基

在養(yǎng)細胞之前,就要了解,你所養(yǎng)細胞的來源以及種類和名稱,查閱一定量的文獻,確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見的細胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來培養(yǎng),有的需要加入一定其他成分,這需要根據(jù)不同的細胞類型,查ATCC細胞庫或者查文獻,才能找到所需**培養(yǎng)液。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細胞的**步。


2、了解細胞的生長習性

不同的細胞生長習性不同。如成纖維細胞是貼壁生長,有一定的密度依賴性,密度小可能會出現(xiàn)不增殖,狀態(tài)差的情況,接種密度大時則需要隔天傳代,頻繁傳代則影響細胞狀態(tài);再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞,是懸浮生長的,傳代需離心棄去上清即可。總之,了解細胞生長習性,再加上正確的計數(shù),才能掌握好傳代的密度。


3、選擇優(yōu)質的血清

血清中含有細胞生長所必須的生長因子,作為哺乳動物細胞培養(yǎng)的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,選擇優(yōu)質的血清,是細胞養(yǎng)殖成功與否的關鍵!


4、及時傳代和更換培養(yǎng)液

在細胞增殖到一定的密度后,要及時傳代,根據(jù)細胞的生長速度和密度,及時更換培養(yǎng)液。更換過勤,浪費培養(yǎng)液,更換不夠及時,則細胞狀態(tài)轉差,一般需隔天更換培養(yǎng)液,具體可根據(jù)所養(yǎng)細胞種類予以調整。


5、絕對的無菌意識

前面林林總總全部都注意好了,如果無菌意識差,細胞中混入了微生物,則千里之堤潰于蟻穴,細菌的生長速度和破壞力,將迅速占領培養(yǎng)皿,破壞細胞結構,有些初學者會在培養(yǎng)液中加入1%的雙抗,但是,無菌意識不強,雙抗亦無法拯救你的細胞!


6、傾心的呵護,頻繁的觀察

做到以上幾點,就可以開始養(yǎng)你的細胞了,但是再次重申細胞嬌弱,在養(yǎng)細胞的過程中,難免會出現(xiàn)一些意想不到的問題,要想成功養(yǎng)好細胞,時時惦記它 ,頻繁地觀察,初期一天觀察2次都不足為過,出現(xiàn)任何預料外的情況,及時處理,才能保障收獲一盤“漂亮”的細胞。