細胞培養(yǎng)是實驗室的常規(guī)操作和科研基礎(chǔ)。其中,保證細胞不受支原體的污染是決定實驗成敗的重要環(huán)節(jié)。然而,支原體污染細胞的發(fā)生率又非常高,有報道高達63%。"/>
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怎樣給細胞做支原體篩查

2020-07-30 11:25來源:威正翔禹|締一生物


細胞培養(yǎng)是實驗室的常規(guī)操作和科研基礎(chǔ)。其中,保證細胞不受支原體的污染是決定實驗成敗的重要環(huán)節(jié)。然而,支原體污染細胞的發(fā)生率又非常高,有報道高達63%。

那么,這些支原體污染是從哪里來的呢?

常可見以下來源:

特別是支原體的污染能通過細胞操作產(chǎn)生的氣溶膠或液滴傳播。一瓶被支原體污染的細胞足以威脅到其他培養(yǎng)的細胞。因此,定期對細胞培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)上清進行支原體的監(jiān)測是非常重要的。


在支原體的各種檢測方法中,常規(guī)PCR法以其

①靈敏度高,特異性好;

②時間短,2-3小時出結(jié)果;

③操作簡單;

④無須昂貴儀器等特點廣受青睞。


但不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異較大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同),需謹慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。


這里小編向您推薦的是德國Minerva Biolabs公司的常規(guī)PCR檢測試劑盒(一步法)(英文名:Venor?Gem OneStep),它經(jīng)過許多用戶使用過,廣受好評。

產(chǎn)品介紹

其中貨號11-8025、11-8050為常備現(xiàn)貨。

優(yōu)勢

①高特異性。如存在支原體污染,則只在270bp左右有一條陽性條帶,無雜帶現(xiàn)象,方便辨識。對其他物種如細菌、真核生物DNA無交叉反應(yīng)。


②可檢測的支原體種類豐富。支原體屬柔膜體綱、支原體目,下分為支原體科、無膽甾原體科和脲原體科,一共有100多種。Venor?Gem一步法試劑盒可檢測85種支原體科成員(含所有污染細胞的常見支原體)、7種無膽甾原體和1種脲原體,十分全面。


③所需樣本量少,僅需2ul。


④靈敏度高,靈敏度高,即使每個反應(yīng)只有20個基因組拷貝,也可以檢測出來。


⑤結(jié)果可靠。檢測時含陰性對照、陽性對照和內(nèi)控對照,可避免假陰性和假陽性。


⑥試劑穩(wěn)定,操作簡單。試劑盒內(nèi)的PCR mix和陽性對照均為凍干粉,穩(wěn)定性強。只需復(fù)溶后即可立即使用,除樣品外,無須添加其他試劑。PCR mix已包含內(nèi)控對照,無須再單獨添加(因此被稱為一步法)。

適用范圍

適用于支原體的篩查。適合細胞培養(yǎng)物和生物樣品,僅作研究使用,不適合藥廠的放行檢測。不適合臨床診斷。

操作步驟

第1步:樣本處理

第2步:試劑制備

第3步:PCR體系建立

第4步:啟動PCR反應(yīng)

第5步:電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶,表明PCR反應(yīng)正常。


當(dāng)樣本存在支原體污染時,由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭,內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ绠?dāng)支原體DNA>103拷貝時)。


當(dāng)支原體DNA>104拷貝時,內(nèi)控對照條帶會完全消失。

在80-90bp可能存在引物退火形成的二聚體條帶,此條帶不影響檢測結(jié)果。


結(jié)果詮釋可依據(jù)下表