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Biocoll細(xì)胞分離液2020-09-18 11:16來源:威正翔禹|締一生物
Biocoll細(xì)胞分離液是最早由德國Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細(xì)胞外,更常用于胰島細(xì)胞的分離。胰島細(xì)胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法,可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細(xì)胞不足及功能低下的問題。 早在2006年,就有文獻(xiàn)報(bào)道Biocoll細(xì)胞分離液可有效分離胰島beta細(xì)胞,細(xì)胞活力和功能都維持良好。但在應(yīng)用Biocoll細(xì)胞分離液時(shí),應(yīng)注意如下事項(xiàng)(以下僅供參考,具體還需實(shí)驗(yàn)者自我確定最終方案): 一、分離方法會(huì)影響胰島的產(chǎn)率和存活率: 因此,取材時(shí)需要注意 1.胰臟應(yīng)快速取材,保持包膜完整。 2.建議采用UW溶液運(yùn)輸。 3.對胰臟進(jìn)行評估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。 4.消化過程不宜進(jìn)行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。 5.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過頭,否則會(huì)影響胰島純化的產(chǎn)率。 二、分離胰島細(xì)胞時(shí)的注意事項(xiàng): 1. biocoll分離液使用時(shí),是采用連續(xù)密度梯度,需要分別配制密度為1.065g/mL(UW溶液與Biocoll混合)和密度為1.095 g/mL(UW溶液與Biocoll混合)的溶液,二者再混合。 2. 分離時(shí)離心1800rpm,可考慮離心10分鐘,之后使COBE細(xì)胞分離機(jī)保持4℃,防止酶激活導(dǎo)致結(jié)構(gòu)完整性破壞。 3. 胰島在最輕密度層,隨著密度增加,也會(huì)有部分胰島,但外分泌組織也會(huì)增多。 Biocoll細(xì)胞分離液(貨號L6155)為澄清無色無菌溶液,密度為 1.分別將7mL和10mL 2.將肝素化抗凝全血(50U/mL肝素,無穩(wěn)定劑)與等體積培養(yǎng)基混合均勻,小心添加在Biocoll細(xì)胞分離液的液面上。 3.1200g離心20min。用巴斯德吸管吸取(70-100%)淋巴細(xì)胞富集層(位于血漿和Biocoll之間),加入培養(yǎng)基中洗2次,*300g離心10min.*200g離心10min,即得所需淋巴細(xì)胞,可以按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)。 附1:血細(xì)胞在連續(xù)密度梯度中的分布 附2:用去鈣鎂離子的PBS稀釋Biocoll的配比公式
D: 不含鈣鎂離子的PBS的密度(1.005) D2:母液的密度(1.10) V%: 應(yīng)加母液的百分比 目前Biocoll細(xì)胞分離液(L6155)備有現(xiàn)貨,歡迎垂詢。 咨詢 QQ:1580434811,QQ:1258888686 訂貨熱線:400-166-8600 產(chǎn)品咨詢:010-84118494 技術(shù)支持:021-64186645 意見建議:13817972641 |