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技術專欄

培養細胞時的細菌檢測

2021-03-29 15:25來源：威正翔禹|締一生物

細胞培養是生物醫學研究的常見操作，其中避免細菌污染是重要一環。對于生命科學實驗室，早期就檢查培養細胞中是否存在細菌污染，對于解決細胞污染問題，是一個合理的選擇。

據估計，高達5%的細胞培養物發生過細菌污染，并且缺乏肉眼可見的細菌污染跡象，如渾濁、培養基突然變色(酚紅)或出現微生物顆粒。此外，細菌可對標準抗生素(如青霉素/鏈霉素)表現出耐藥性，并直接影響細胞代謝、生長和分化。因此，采用一款快速、靈敏、可靠的細菌檢測試劑盒，就顯得尤為必要。

德國MB公司專門設計的細菌PCR檢測Kit可以直接檢測細胞培養、細胞培養衍生的生物制劑和細胞培養基中的細菌污染。下面小編介紹一下。

一、產品信息

培養細胞時的細菌檢測1.jpg

二、產品描述

該試劑盒采用PCR方法，用于檢測生物樣品（包括細胞培養物和病毒貯存液）中是否存在細菌。

該試劑盒針對細菌16S rRNA基因高度保守區。根據序列一致性，可至少檢測污染細胞常見的45種細菌屬，具體如下：

放線菌Actinomyces

芽孢桿菌Bacillus

腸球菌Enterococcus

埃希氏桿菌Escherichia

梭菌Fusobacterium

克雷伯氏菌Klebsiella

乳酸桿菌Lactobacillus

微球菌Micrococcus

分枝桿菌Mycobacterium

假單胞菌Pseudomonas

卟啉單胞菌Porphyromonas

普氏菌Prevotella

沙門氏菌Salmonella

沙雷氏菌Serratia

軍團菌Legionella

葡萄球菌Staphylococcus

鏈球菌Streptococcus

消化鏈球菌Peptostreptococcus

該試劑盒靈敏度達到100個基因組拷貝/PCR反應。

說明：該試劑盒只用于科研，不用于工業QC。

三、試劑盒包括：

凍干型PCR mix：含引物/核苷酸/內控對照DNA /熱啟動聚合酶；

復溶緩沖液；

凍干型陽性對照DNA；

PCR級水。

四、樣本處理

樣本不用提DNA，只需熱滅活（95 °C 5分鐘）；

樣本需不含抗生素，如含抗生素，則細胞應在不含抗生素的培養基中培養至少一代后再檢測。

五、反應體系

25μl反應體系：含20 μl PCR Mix和5μl模板。

六、結果判定

PCR結束后在瓊脂糖電泳上跑膠。典型結果如下圖所示。

圖. 電泳分析結果。左側為內控對照條帶，在140bp，用于排除假陰性。如有內控條帶，則顯示PCR反應正常，樣本中無PCR抑制成分。右側為目的條帶，在467bp左右。如有目的條帶，則提示有細菌污染。

七、產品引用文獻

Simonsen ?. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.