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DIY外泌體專用血清的常用方法2021-11-12 14:51來(lái)源:威正翔禹|締一生物
各位小伙伴們,晚上好! 今天文章的主題是無(wú)外泌體血清。 外泌體大家應(yīng)該都很熟悉。1983年,在綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中**發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)在生物學(xué)研究領(lǐng)域炙手可熱的“小網(wǎng)紅”——一種特殊囊泡結(jié)構(gòu),并與1987年正式被命名為“exosome”。
外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。為細(xì)胞間通訊的重要媒介,它像一個(gè)信使,為細(xì)胞與胞外環(huán)境傳遞信息,保障機(jī)體的正常工作。 越來(lái)越多的科研人員投入到外泌體的研究中,根據(jù)PubMed統(tǒng)計(jì)顯示,最近幾年,外泌體研究呈爆炸增長(zhǎng)。 外泌體的研究離不開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)。以腫瘤相關(guān)外泌體研究為例,目前,收集腫瘤細(xì)胞外泌體主要有兩種方法:
方法一 使用正常培液養(yǎng)細(xì)胞再換無(wú)血清培液收外泌體。 方法二 直接使用exosome-free FBS配制培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細(xì)胞收外泌體。 從現(xiàn)有的一些研究可以看出[1][2][3][4][5],研究人員更傾向于方法二,也就是使用exosome-free FBS培養(yǎng)細(xì)胞再收上清分離exosomes的方法,至少腫瘤研究方面是這樣的。
相關(guān)文獻(xiàn)在這里 所以,接下來(lái)就不得不講講exosome-free FBS——無(wú)外泌體血清了。
顧名思義,無(wú)外泌體血清就是外泌體含量極低,低到幾乎沒(méi)有的血清(以粒徑分析結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)),獲得主要有兩種途徑: 直接購(gòu)買商品化的產(chǎn)品 自己DIY制備
如果選擇自己制備無(wú)外泌體血清,最常用的方法就是超速離心法。主要有三種策略:(前提是將血清用正確的方法徹底解凍,分裝,按照實(shí)驗(yàn)需求選擇合適用量進(jìn)行去除外泌體的實(shí)驗(yàn),血清解凍方法請(qǐng)參照這里:如何解凍血清才能**程度保證活性?) 將血清與培養(yǎng)基1:4比例稀釋,然后超速離心10000g過(guò)夜收集上清; 直接將血清速離心10000g過(guò)夜收集上清; 180000g離心3-6小時(shí)收集上清。 P.S.其中,離心的過(guò)夜時(shí)間要視情況而定,一般在10-14小時(shí)之間,也可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。 需要注意的是,離心后,外泌體會(huì)富集在試管底部,在吸取上層血清的時(shí)候,不要觸碰底部沉淀,避免吸到沉底的外泌體,“一夜回到解放前”。 另外,只吸取80%左右的上層血清,其余的渾濁血清留作其他非外泌體用途細(xì)胞的培養(yǎng),畢竟血清也挺貴的,避免不必要的浪費(fèi)。 針對(duì)超速離心后的血清,可進(jìn)行粒徑檢測(cè)(離心前樣品和離心后樣品),如果覺(jué)得純度不夠,再把離心后收集的血清做二次超速離心。 當(dāng)然啦,以上方法也只是我們根據(jù)已有文獻(xiàn)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的來(lái)的,僅供大家參考,如果有更好的方法,也歡迎在評(píng)論區(qū)和我們交流! 選擇自己手動(dòng)DIY無(wú)外泌體血清,可以在一定程度降低血清的成本,Ausbian血清,高品質(zhì),實(shí)驗(yàn)更安心,用來(lái)DIY成外泌體實(shí)驗(yàn)專用血清也是不錯(cuò)的選擇。 點(diǎn)擊下方圖片,了解更多血清產(chǎn)品 如果你對(duì)本公司產(chǎn)品感興趣,想要了解更多,歡迎訪問(wèn) 北京締一生物官網(wǎng):www.dyshengwu.com 或聯(lián)系北京締一生物公司 咨詢熱線: 400-166-8600 010-84118494 021-64186645 13811167915 咨詢QQ: 1580434811 咨詢QQ: 1258888686 客服郵箱:servicebj@viansaga.com 客服郵箱:servicesh@viansaga.com 聲明:本網(wǎng)站所有注明“來(lái)源:締一生物”的內(nèi)容,版權(quán)均屬于北京締一生物網(wǎng)站所有,受到知識(shí)產(chǎn)權(quán)的法律保護(hù)。如需引用、轉(zhuǎn)載,須注明來(lái)源及原文鏈接。如內(nèi)容涉及實(shí)質(zhì)性修改,須來(lái)電獲取書面授權(quán),且轉(zhuǎn)載時(shí),須注明“來(lái)源:締一生物”。 最終解釋權(quán)歸締一生物所有。 |