|
細胞傳代干貨,建議收藏2022-04-20 16:46來源:威正翔禹|締一生物
Cell Culture 什么是細胞傳代? 細胞傳代培養(subculture),當原代培養成功以后,隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利于生長或發生中毒。 將培養物分割成小的部分,重新接種到另外的培養器皿(瓶)內,再進行培養的過程被稱之為細胞傳代培養。對單層培養而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。 Vol .1 耗材準備 在實驗開始前,需要把實驗用品準備齊全。 酒精、預熱好的完全培養基、PBS緩沖液、胰酶、培養瓶或培養皿、移液器、移液管、離心管等 實驗用的超凈工作臺需提前半小時照射紫外線。 Vol .2 實驗操作 以貼壁細胞培養為例 1、穿好細胞房專用的實驗服,戴好滅菌手套和口罩。 2、從培養箱中取出細胞培養瓶或培養皿(Tip1:一般選擇處于對數期的細胞),用75%酒精消毒外包裝后轉移至到超凈臺中。 3、打開蓋子(Tip2:如果是培養皿,只需打開一個縫隙即可,避免污染),輕輕吸出舊的培養液,加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次(Tip3:注意從未培養細胞的側壁加入,以免沖掉細胞),棄去PBS緩沖液。 4、用移液器加入適量胰酶(Tip4:具體量根據實驗需要確定,提前將胰酶37℃預熱,效果更好),蓋好蓋子,“十字”晃動,使胰酶充分接觸細胞。 5、將加入胰酶的細胞培養瓶轉移到倒置顯微鏡載物臺,鏡下觀察細胞消化情況,當細胞變圓且大量脫落時,準備終止消化(Tip5:若初始的細胞密度比較高,加入胰酶后,肉眼也可觀察到細胞脫落,當細胞有一半左右脫落時,即可終止消化,避免反復將培養皿拿出超凈臺,避免增加污染的風險),用75%的酒精噴灑培養瓶表面,轉移到超凈臺。 6、用移液器加入等量含血清培養基,終止消化。移液器充分且柔和地吹打,避免產生氣泡,使細胞完全脫落。 7、將培養瓶或培養皿中混合液體轉移至離心管中(離心管規格根據實驗需要確定),配平后離心3-5分鐘左右(離心機轉速根據細胞種類而定,常見的有1000-3000rpm/min)。 8、離心好后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉移進超凈臺,打開蓋子,將上清液倒入廢液缸。 9、加入適量體積含血清培養基,用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,制成細胞懸液。 10、將細胞懸液分裝進2個(或多個)潔凈滅菌培養瓶或培養皿中,加入適量培養基,蓋好蓋子。 11、將分裝好的培養瓶置于倒置顯微鏡載物臺,觀察細胞情況,細胞應保證一定數量,數量太少會影響生長情況。 12、在培養瓶上做標記,注明傳代時間,細胞種類,操作人員等信息。在放入培養箱之前應再次用酒精噴一噴培養瓶表面,然后應記得整理操作臺,用75%酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。 好物推薦 ? Ausbian 血清在細胞培養過程中的重要性不言而喻:
一款優質的血清,絕對能成為細胞實驗的“最強輔助”。 Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比,有獨特優勢: 1. 精選內毒素更低批次(≤3EU/ml),原裝進口。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。 2. 新批次在試用前,提供試用服務,養細胞更放心。 3. 每個批次產量800-2000升,試用滿意的實驗室批號優先鎖定,保證大多數項目兩年不需換批次,細胞試驗數據穩定。 4. 每年按廠家生產順序,會有多批次平行供應,每個實驗室專屬批號管理,保證供貨穩定。 5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持,具有完整的檢測報告,為各類項目的申報提供支持。(同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面,提供更多免費延伸性技術幫助)。 6. 針對特殊科研項目,可提供3-5個平行批次,讓試驗人有更多選擇空間。 7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務,為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護,按要求隨時發貨。 8. Ausbian血清從出廠,到實驗室,全程低溫冷鏈保護,確保血清無反復凍融。 9. 免費真品保障,每個血清瓶身加貼Viansaga?易破損防偽標簽,Ausbian品牌真品保護,逢假必究,為實驗室做好售后保障。 10. 免費無憂售后,所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清,從簽收日開始計算,一年之內,血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下,均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。 11. 免費專業幫助,匯集近二十年,千萬個血清用戶細胞培養經驗,為各種細胞培養提供問題梳理分析,解決方案參考。 12. Ausbian品牌擁有全系列血清產品線: 特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清(貨號:WS500T(紅點)),透析胎牛血清 (貨號:VS500TZ )等多系列產品,服務更專業更精準。 如果你對本公司產品感興趣,想要了解更多,歡迎訪問 北京締一生物官網: www.dyshengwu.com 上海威正翔禹生物網站: www.klyyp.com 或聯系北京締一生物公司 咨詢熱線: 400-166-8600 010-84118494 021-64186645 13811167915 咨詢QQ: 1580434811 咨詢QQ: 1258888686 客服郵箱:servicebj@viansaga.com 客服郵箱:servicesh@viansaga.com 聲明:本網站所有注明“來源:締一生物”的內容,版權均屬于北京締一生物網站所有,受到知識產權的法律保護。如需引用、轉載,須注明來源及原文鏈接。如內容涉及實質性修改,須來電獲取書面授權,且轉載時,須注明“來源:締一生物”。 最終解釋權歸締一生物所有。 上一篇: 保姆級細胞凍存方法
下一篇: 支原體祛除劑使用攻略
|