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細(xì)胞傳代干貨,建議收藏2022-04-20 16:46來源:威正翔禹|締一生物
Cell Culture 什么是細(xì)胞傳代? 細(xì)胞傳代培養(yǎng)(subculture),當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時間的延長和細(xì)胞不斷分裂,一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。 將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)的過程被稱之為細(xì)胞傳代培養(yǎng)。對單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。 Vol .1 耗材準(zhǔn)備 在實驗開始前,需要把實驗用品準(zhǔn)備齊全。 酒精、預(yù)熱好的完全培養(yǎng)基、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿、移液器、移液管、離心管等 實驗用的超凈工作臺需提前半小時照射紫外線。 Vol .2 實驗操作 以貼壁細(xì)胞培養(yǎng)為例 1、穿好細(xì)胞房專用的實驗服,戴好滅菌手套和口罩。 2、從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿(Tip1:一般選擇處于對數(shù)期的細(xì)胞),用75%酒精消毒外包裝后轉(zhuǎn)移至到超凈臺中。 3、打開蓋子(Tip2:如果是培養(yǎng)皿,只需打開一個縫隙即可,避免污染),輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次(Tip3:注意從未培養(yǎng)細(xì)胞的側(cè)壁加入,以免沖掉細(xì)胞),棄去PBS緩沖液。 4、用移液器加入適量胰酶(Tip4:具體量根據(jù)實驗需要確定,提前將胰酶37℃預(yù)熱,效果更好),蓋好蓋子,“十字”晃動,使胰酶充分接觸細(xì)胞。 5、將加入胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺,鏡下觀察細(xì)胞消化情況,當(dāng)細(xì)胞變圓且大量脫落時,準(zhǔn)備終止消化(Tip5:若初始的細(xì)胞密度比較高,加入胰酶后,肉眼也可觀察到細(xì)胞脫落,當(dāng)細(xì)胞有一半左右脫落時,即可終止消化,避免反復(fù)將培養(yǎng)皿拿出超凈臺,避免增加污染的風(fēng)險),用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面,轉(zhuǎn)移到超凈臺。 6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基,終止消化。移液器充分且柔和地吹打,避免產(chǎn)生氣泡,使細(xì)胞完全脫落。 7、將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中(離心管規(guī)格根據(jù)實驗需要確定),配平后離心3-5分鐘左右(離心機(jī)轉(zhuǎn)速根據(jù)細(xì)胞種類而定,常見的有1000-3000rpm/min)。 8、離心好后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺,打開蓋子,將上清液倒入廢液缸。 9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基,用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,制成細(xì)胞懸液。 10、將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)2個(或多個)潔凈滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,加入適量培養(yǎng)基,蓋好蓋子。 11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺,觀察細(xì)胞情況,細(xì)胞應(yīng)保證一定數(shù)量,數(shù)量太少會影響生長情況。 12、在培養(yǎng)瓶上做標(biāo)記,注明傳代時間,細(xì)胞種類,操作人員等信息。在放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面,然后應(yīng)記得整理操作臺,用75%酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。 好物推薦 ? Ausbian 血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:
一款優(yōu)質(zhì)的血清,絕對能成為細(xì)胞實驗的“最強(qiáng)輔助”。 Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比,有獨(dú)特優(yōu)勢: 1. 精選內(nèi)毒素更低批次(≤3EU/ml),原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。 2. 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養(yǎng)細(xì)胞更放心。 3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數(shù)項目兩年不需換批次,細(xì)胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。 4. 每年按廠家生產(chǎn)順序,會有多批次平行供應(yīng),每個實驗室專屬批號管理,保證供貨穩(wěn)定。 5. 為Ausbian血清用戶免費(fèi)提供申報支持,具有完整的檢測報告,為各類項目的申報提供支持。(同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面,提供更多免費(fèi)延伸性技術(shù)幫助)。 6. 針對特殊科研項目,可提供3-5個平行批次,讓試驗人有更多選擇空間。 7. 為Ausbian血清提供免費(fèi)代儲存服務(wù),為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護(hù),按要求隨時發(fā)貨。 8. Ausbian血清從出廠,到實驗室,全程低溫冷鏈保護(hù),確保血清無反復(fù)凍融。 9. 免費(fèi)真品保障,每個血清瓶身加貼Viansaga?易破損防偽標(biāo)簽,Ausbian品牌真品保護(hù),逢假必究,為實驗室做好售后保障。 10. 免費(fèi)無憂售后,所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清,從簽收日開始計算,一年之內(nèi),血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下,均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。 11. 免費(fèi)專業(yè)幫助,匯集近二十年,千萬個血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗,為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問題梳理分析,解決方案參考。 12. Ausbian品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線: 特級胎牛血清、細(xì)胞治療專用胎牛血清(貨號:WS500T(紅點)),透析胎牛血清 (貨號:VS500TZ )等多系列產(chǎn)品,服務(wù)更專業(yè)更精準(zhǔn)。 如果你對本公司產(chǎn)品感興趣,想要了解更多,歡迎訪問 北京締一生物官網(wǎng): www.dyshengwu.com 上海威正翔禹生物網(wǎng)站: www.klyyp.com 或聯(lián)系北京締一生物公司 咨詢熱線: 400-166-8600 010-84118494 021-64186645 13811167915 咨詢QQ: 1580434811 咨詢QQ: 1258888686 客服郵箱:servicebj@viansaga.com 客服郵箱:servicesh@viansaga.com 聲明:本網(wǎng)站所有注明“來源:締一生物”的內(nèi)容,版權(quán)均屬于北京締一生物網(wǎng)站所有,受到知識產(chǎn)權(quán)的法律保護(hù)。如需引用、轉(zhuǎn)載,須注明來源及原文鏈接。如內(nèi)容涉及實質(zhì)性修改,須來電獲取書面授權(quán),且轉(zhuǎn)載時,須注明“來源:締一生物”。 最終解釋權(quán)歸締一生物所有。 上一篇: 保姆級細(xì)胞凍存方法
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