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細(xì)胞傳代干貨,建議收藏

2022-04-20 16:46來源:威正翔禹|締一生物

Cell Culture

什么是細(xì)胞傳代?

細(xì)胞傳代培養(yǎng)(subculture),當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時間的延長和細(xì)胞不斷分裂,一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。


將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)的過程被稱之為細(xì)胞傳代培養(yǎng)。對單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。


Vol .1

耗材準(zhǔn)備


在實驗開始前,需要把實驗用品準(zhǔn)備齊全。


酒精、預(yù)熱好的完全培養(yǎng)基、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿、移液器、移液管、離心管等


實驗用的超凈工作臺需提前半小時照射紫外線。


Vol .2

實驗操作

以貼壁細(xì)胞培養(yǎng)為例


1、穿好細(xì)胞房專用的實驗服,戴好滅菌手套和口罩。


2、從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿(Tip1:一般選擇處于對數(shù)期的細(xì)胞),用75%酒精消毒外包裝后轉(zhuǎn)移至到超凈臺中。


3、打開蓋子Tip2:如果是培養(yǎng)皿,只需打開一個縫隙即可,避免污染),輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次(Tip3:注意從未培養(yǎng)細(xì)胞的側(cè)壁加入,以免沖掉細(xì)胞),棄去PBS緩沖液。


4、用移液器加入適量胰酶(Tip4:具體量根據(jù)實驗需要確定,提前將胰酶37℃預(yù)熱,效果更好),蓋好蓋子,“十字”晃動,使胰酶充分接觸細(xì)胞。


5、將加入胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺,鏡下觀察細(xì)胞消化情況,當(dāng)細(xì)胞變圓且大量脫落時,準(zhǔn)備終止消化(Tip5:若初始的細(xì)胞密度比較高,加入胰酶后,肉眼也可觀察到細(xì)胞脫落,當(dāng)細(xì)胞有一左右脫落時,即可終止消化,避免反復(fù)將培養(yǎng)皿拿出超凈臺,避免增加污染的風(fēng)險),用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面,轉(zhuǎn)移到超凈臺。


6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基,終止消化。移液器充分且柔和地吹打,避免產(chǎn)生氣泡,使細(xì)胞完全脫落。


7、將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中(離心管規(guī)格根據(jù)實驗需要確定),配平后離心3-5分鐘左右(離心機(jī)轉(zhuǎn)速根據(jù)細(xì)胞種類而定,常見的有1000-3000rpm/min)


8、離心好后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺,打開蓋子,將上清液倒入廢液缸。


9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基,用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,制成細(xì)胞懸液。


10、將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)2個(或多個)潔凈滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,加入適量培養(yǎng)基,蓋好蓋子。


11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺,觀察細(xì)胞情況,細(xì)胞應(yīng)保證一定數(shù)量,數(shù)量太少會影響生長情況。


12、在培養(yǎng)瓶上做標(biāo)記,注明傳代時間,細(xì)胞種類,操作人員等信息。在放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面,然后應(yīng)記得整理操作臺,用75%酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。




好物推薦 ?

Ausbian

血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:


  • 提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

  • 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

  • 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

  • 參與細(xì)胞凍存。

    ......


一款優(yōu)質(zhì)的血清,絕對能成為細(xì)胞實驗的“最強(qiáng)輔助”。


Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比,有獨(dú)特優(yōu)勢:

圖片


1. 精選內(nèi)毒素更低批次(≤3EU/ml),原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

2. 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養(yǎng)細(xì)胞更放心。

3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數(shù)項目兩年不需換批次,細(xì)胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序,會有多批次平行供應(yīng),每個實驗室專屬批號管理,保證供貨穩(wěn)定。

5. 為Ausbian血清用戶免費(fèi)提供申報支持,具有完整的檢測報告,為各類項目的申報提供支持。(同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面,提供更多免費(fèi)延伸性技術(shù)幫助)。

6. 針對特殊科研項目,可提供3-5個平行批次,讓試驗人有更多選擇空間。

7. 為Ausbian血清提供免費(fèi)代儲存服務(wù),為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護(hù),按要求隨時發(fā)貨。

8. Ausbian血清從出廠,到實驗室,全程低溫冷鏈保護(hù),確保血清無反復(fù)凍融。

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10. 免費(fèi)無憂售后,所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清,從簽收日開始計算,一年之內(nèi),血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下,均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 免費(fèi)專業(yè)幫助,匯集近二十年,千萬個血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗,為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問題梳理分析,解決方案參考。

12. Ausbian品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線:

特級胎牛血清、細(xì)胞治療專用胎牛血清(貨號:WS500T(紅點)),透析胎牛血清 (貨號:VS500TZ   )等多系列產(chǎn)品,服務(wù)更專業(yè)更精準(zhǔn)。



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