常規(guī)細胞實驗大匯總（二）

在上期介紹過一些檢測細胞增殖，細胞凋亡的常規(guī)方法。

今天來到常規(guī)實驗大匯總的第二期，一起來學(xué)習(xí)細胞膜片鉗技術(shù)、細胞遷移和侵襲技術(shù)。

細胞膜片鉗技術(shù)：

膜片鉗技術(shù)（patch clamp techniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進行記錄的微電極技術(shù)。

檢測原理：

用一個尖端直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細胞膜表面，通過負壓吸引使電極尖端與細胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時電極尖端下的細胞膜小區(qū)域（膜片, patch）與其周圍在電學(xué)上分隔，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制, Clamp）電位，對此膜片上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測及記錄。

用途：

細胞膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細胞膜電流及離子通道的最重要的技術(shù)。可用于研究與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道、離子通道生理與病理作用機制。另外，還利用膜片鉗對單細胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究、對藥物作用機制的研究、創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選研究、甚至是能用在神經(jīng)科學(xué)的相關(guān)研究中。

由于其應(yīng)用廣泛，因此被稱為研究離子通道的“金標準”。

特點：

實用、快速、靈敏、準確及重復(fù)性好，并且還在不斷地改良、優(yōu)化。

細胞遷移和侵襲 Transwell：

是一種用來研究細胞侵襲的實驗技術(shù)。

檢測原理：

簡單來說，就是用一層膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)基與低營養(yǎng)的培養(yǎng)基分隔開。然后將細胞放在低營養(yǎng)的培養(yǎng)基中，細胞為了生存，為了獲取更多的營養(yǎng)，會向高營養(yǎng)的培養(yǎng)基里面移動。但是由于膜的存在，因此必須要進行穿膜。

在膜上涂上一層基質(zhì)膠，用來模仿細胞外基質(zhì)。細胞想要通過膜，就需要先把基質(zhì)消化了才能進入高營養(yǎng)培養(yǎng)基中。最終只需要檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)基中的細胞量就推算出細胞的侵襲能力。

用途：

由于商品化Transwell試劑盒的出現(xiàn)，使得濾膜多樣化，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。

特點：

高效、迅速，普適度高，可應(yīng)用于多種實驗。

劃痕實驗：

也叫創(chuàng)傷愈合實驗，是一種簡單快捷的測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的方法。

檢測原理：

在體外培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)皿中的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它無菌的硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，用以去除中央部分的細胞，然后按照實驗設(shè)定的時間（36h、72h等），繼續(xù)培養(yǎng)細胞。取出細胞培養(yǎng)板，觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細胞是否生長至中央劃痕區(qū)，進而判斷細胞的生長遷移能力。

實驗通常還需設(shè)定正常對照組和實驗組,實驗組往往是加了某種處理因素、藥物或外源性基因等，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，來判斷各組細胞的遷移與修復(fù)能力。

用途：

可以用來確定貼壁細胞的遷移速率。

特點：

簡捷、成本低、實驗結(jié)果直觀。但測量適用的細胞范圍較小，一般只適用于上皮細胞，纖維樣細胞。

Ausbian血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：