原代細胞培養(yǎng)小技巧（一）

原代細胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng)，是建立細胞系的**步。

原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用廣泛：

1. 為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；
   

2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；

3. 服務(wù)于臨床實踐，用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。

原代細胞培養(yǎng)需要一定的技巧，尤其是一些細節(jié)，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細胞培養(yǎng)的小技巧，希望大家能有所收獲！

取材是原代細胞培養(yǎng)過程中的**步，也是至關(guān)重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項。

一、組織塊培養(yǎng)法

1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上，要避免頻繁晃動。

2、加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3、當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。

4、為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

二、貼壁型原代細胞

1、原代培養(yǎng)的分離細胞，在初次接觸體外環(huán)境時，細胞之間會互相影響，產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，促進彼此的存活和生長。

因此，接種密度要適宜。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程；如果接種的細胞密度過大，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

2、盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

三、懸浮型原代細胞

1、必須保持細胞的懸浮狀態(tài)。可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液，以5ml為最低限度，否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。

2、能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短。

當(dāng)原代細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，就可按照正常細胞培養(yǎng)流程進行培養(yǎng)即可。