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如何檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體污染

2024-05-14 16:26

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，支原體污染的檢測(cè)方法有多種，以下是幾種常用的方法：

分子檢測(cè)（核酸擴(kuò)增試驗(yàn)）：這是診斷肺炎支原體感染的首選方法，具有較高的敏感性和特異性。通過(guò)檢測(cè)支原體的核酸來(lái)確認(rèn)其存在。

血清學(xué)檢測(cè)：這種方法通過(guò)檢測(cè)血清中的支原體抗體，包括IgM抗體和IgG抗體，來(lái)判斷是否感染支原體。其中，IgG抗體一般提示肺炎支原體已感染，但無(wú)法區(qū)分急性感染和既往感染；而IgM抗體的增加大多預(yù)示著急性感染的可能性。

相差顯微鏡檢測(cè)：將細(xì)胞接種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的蓋玻片上，24小時(shí)后取出，用相差油鏡觀察。支原體在相差顯微鏡下呈現(xiàn)為暗色微小顆粒，位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。

熒光染色法：使用特異熒光染料（如Hoechst 33258）對(duì)支原體DNA進(jìn)行染色，然后在熒光顯微鏡下觀察。如果檢測(cè)樣品為支原體污染，則附在細(xì)胞表面的支原體DNA會(huì)著色，形成亮綠色小點(diǎn)。

電鏡檢測(cè)：利用掃描電鏡或透射電鏡直接觀察支原體。這種方法非常直觀、準(zhǔn)確，但對(duì)使用環(huán)境要求高，操作復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)。

PCR法：這是一種具有高靈敏度、特異性和快速性的檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)支原體DNA的特異性擴(kuò)增來(lái)判斷是否存在支原體污染。但該方法對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求嚴(yán)格，實(shí)驗(yàn)成本較高，有時(shí)還有假陽(yáng)性的現(xiàn)象出現(xiàn)。

培養(yǎng)法：將標(biāo)本進(jìn)行支原體的培養(yǎng)，屬于普通以及原始的方法，檢測(cè)準(zhǔn)確性也會(huì)比較高。但支原體培養(yǎng)的環(huán)境和條件苛刻，需要2~3周才能長(zhǎng)出來(lái)，所以一般不作為首選方法。

以上方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，可以根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的方法進(jìn)行檢測(cè)。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中存在支原體污染，應(yīng)及時(shí)采取措施進(jìn)行處理，以避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和細(xì)胞健康造成影響。