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細胞培養(yǎng)污染源及其挽救措施2024-07-22 16:46
在細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染時,我們應該如何減少損失,避免后續(xù)培養(yǎng)重蹈覆轍。 污染來源 污染物進入培養(yǎng)系統(tǒng)有許多不同的途徑。**種是通過組織培養(yǎng)材料。我們在使用前應對所有培養(yǎng)使用到的塑料耗材和玻璃器皿進行消毒,盡管許多耗材已經在售出前進行了消毒,但我們在打開包裝時還應小心污染。 此外,組織培養(yǎng)液,如培養(yǎng)基、血清和PBS等培養(yǎng)過程中使用的液體,也應過濾除菌(過0.22μm孔徑的膜)。我們在啟封培養(yǎng)用的試劑時,應該檢測其是否被污染(無菌培養(yǎng))。進入組織培養(yǎng)柜的所有設備應噴灑70%乙醇或替代消毒劑(例如:稀釋的次氯酸鹽或1%苯扎氯銨)。 從水浴鍋中取出的瓶子,這些應該用乙醇噴灑表面殺菌,因為水浴后可以有效地將真菌吸引到它們的外表面。臟的實驗服是另一個極好的污染源。在潔凈工作臺的無菌環(huán)境中工作,應注意避免持續(xù)或不必要地進出潔凈工作臺。應盡可能減少氣溶膠產生(一般使用吸引器的時候容易產生)。培養(yǎng)物或培養(yǎng)基發(fā)生溢出時,應立即清洗。此外應定期徹底清洗培養(yǎng)箱和潔凈工作臺。培養(yǎng)操作時盡量減少細胞培養(yǎng)室的人員走動,減少培養(yǎng)箱的開閉,以此來降低微生物傳播的可能性! 最后,傳播污染的一種常見方式是將細胞系從另一個位置轉移到實驗室。實驗室新引入的細胞系應謹慎隔離和處理,直到證明不含微生物,除非在轉移前已確認不含微生物(例如,如果從正規(guī)的細胞庫中獲得)。 微生物污染的預防和抗生素的使用 防止微生物污染的基石是無菌技術的踐行。常規(guī)細胞培養(yǎng)中抗生素從不缺席,但出于多種原因,通常不鼓勵使用。首先,優(yōu)秀無菌技術的實施使抗生素的添加變得不必要。盡管抗生素可能會抑制微生物污染,但它們可能無法徹底消除污染,并且可能會導致產生耐藥性微生物。
無菌技術不佳不應依賴抗生素使用來改善,重要的是盡早發(fā)現(xiàn)污染源。有一項數(shù)據分析支持了這一觀點:①72%在抗生素中連續(xù)生長的培養(yǎng)物顯示支原體呈陽性,而在沒有抗生素的情況下僅7%培養(yǎng)物被感染。②抗生素可能會影響培養(yǎng)細胞的生化數(shù)據,從而影響實驗結果。 短期使用抗生素在許多不同情況下可能具有有用的戰(zhàn)略價值。其中包括原始樣品的初始培養(yǎng)(如原代細胞的分離)以及處理受污染的樣品(已經是實驗室獨苗的那種,或者是非常非常珍貴的)。后者將取決于污染程度,并且僅在污染程度仍處于相對早期階段時才可行。在大多數(shù)情況下,受污染的培養(yǎng)物應立即進行高壓滅菌,廢棄! 污染培養(yǎng)物的挽救措施 對于那些是實驗室獨苗且異常珍貴的培養(yǎng)物,他們如果被污染了,在早期消除污染可能是可行的。首先我們要確定污染類型(細菌、真菌、酵母或支原體),然后我們可以使用Zell Shield?,細胞支原體去除劑,該產品是通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成,有效抑制上述微生物的增殖。無細胞毒性,采用復合支原體敏感抗生素,對大多數(shù)細胞株無毒。在細胞培養(yǎng)期間,Zell Shield?始終保持穩(wěn)定的活性。Zell Shield?為無菌溶液,可直接加入培養(yǎng)基使用。 |