qPCR實驗過程中如何避免核酸污染

在定量聚合酶鏈式反應（qPCR）實驗中，核酸污染是一個常見的問題，它不僅影響實驗結果的準確性，還可能帶來嚴重的假陽性或假陰性結果。因此，避免核酸污染是確保實驗成功的關鍵。以下是一系列預防和處理核酸污染的措施。

1. 實驗室的合理布局與分區

合理的實驗室布局是預防核酸污染的基礎。一個標準的qPCR實驗室應分為試劑準備區、樣本制備區、核酸擴增區和產物分析區。每個區域應獨立通風，通過壓力系統控制空氣流動方向，形成單**向，即從試劑準備區流向產物分析區。這種布局可以大大減少不同區域間的交叉污染。

2. 實驗設備的專用與清潔

各區域都應有專用的儀器設備，并明確標記，避免設備物品如加樣器或試劑等在不同區域間混淆使用。此外，實驗設備應定期清潔和消毒，特別是移液器、離心機等頻繁使用的設備。移液器污染是一個值得注意的問題，操作時應小心，避免將樣品或模板核酸吸入槍內或粘上槍頭。使用德國MB公司的PCR Clean清潔實驗環境

3. 實驗操作的規范與防護

實驗人員需要嚴格遵守操作規程，加強個人防護。在標本處理、試劑配制、核酸擴增等關鍵環節，應采用生物安全柜等專用設備，以有效捕獲和過濾實驗過程中產生的氣溶膠。實驗結束后，應及時對實驗臺面、儀器設備等進行徹底清潔和消毒，防止殘留污染。

4. 試劑與耗材的管理

所有PCR試劑都應小量分裝，以減少重復加樣次數和污染機會。PCR試劑、PCR反應液應與樣品及PCR產物分開保存，不應放于同一冰盒或同一冰箱。使用一次性耗材，如吸頭、離心管等，可以避免交叉污染。

5. 設立適當的對照

設立陽性對照和陰性對照是驗證實驗可靠性和判斷擴增系統可信性的重要手段。陽性對照以能出現擴增條帶的最低量的標準病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性。陰性對照則用于檢測實驗過程中是否存在污染。

6. 實驗室的清潔與消毒

定期對實驗室進行全面消毒，包括使用紫外線照射、化學消毒劑噴灑等方法。使用專業的核酸污染清除劑對實驗室臺面、設備、地面等進行徹底清潔和消毒。清理污染物時，應嚴格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸汽滅菌處理，并進行實驗室換氣等，防止次生危害。

7. 實驗后的處理與監測

實驗結束后，所有的試劑應按照要求進行存放，廢料和廢液及時清理，避免存放過多和過久。使用有效氯含量的消毒水對移液槍、離心管架等物品進行浸泡消毒。對污染區域內的設備，如擴增儀、全自動提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進行反復處理。同時，設計陰性對照組，根據陰性對照確認污染情況，確保污染得到控制后再恢復正常實驗。

避免核酸污染需要從實驗室布局、設備管理、實驗操作、試劑與耗材管理、對照設立、清潔與消毒以及實驗后處理等多個方面入手。只有嚴格遵守這些措施，才能確保qPCR實驗的準確性和可靠性。