PCR實驗中DNA/RNA污染怎么辦

在PCR實驗中，DNA/RNA污染是一個常見且嚴重的問題，它可能導致實驗結果的假陽性或誤差。以下是一些針對PCR實驗中DNA/RNA污染的處理措施：

一、污染源分析

首先，需要明確污染源。PCR實驗中的DNA/RNA污染可能來自多個方面，包括但不限于：

PCR擴增產物的污染：PCR產物經反復多次的擴增，其復制量遠遠超過PCR的檢測極限，所以即使是極微量的污染也足以造成實驗結果假陽性。

試劑的污染：在試劑的配制過程中，可能因接觸污染的容器、移液器、槍頭、溶液等而導致試劑被污染。

待測樣品的污染：放置樣品的容器被污染，或由于容器密封不嚴導致樣品與外界接觸被污染；在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭；某些樣品中含有病毒，若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。

氣溶膠污染：氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產生的，開蓋、晃動反應管及污染加樣器的反復吸樣都可能形成氣溶膠，從而導致交叉污染。

二、預防措施

為預防DNA/RNA污染，應采取以下措施：

設置陰性對照：設置一個不含模板DNA但含有PCR系統中所有其他成分的對照反應，以監測污染情況，判斷污染原因，并采取措施防止和消除污染。

實驗室分區：按照相關規定對PCR實驗室進行分區，確保工作和空氣流向嚴格遵循試劑準備區→標本制備區→PCR擴增區→產物分析區的順序。

提高規范操作意識：定期組織全員進行防污染安全培訓，宣講PCR實驗室操作規范，并印發相關文件供學習。

常規操作清潔：在樣本處理前后，使用專門的PCR污染清除劑，比如：PCR-Clean?，清潔設備、耗材、操作臺等。

三、處理措施

一旦PCR實驗中出現DNA/RNA污染，應采取以下處理措施：

重點清潔：對重點區域、核酸提取儀、PCR儀、離心機等關鍵設備進行清潔操作，確保氣溶膠污染沒有累積。

月度清潔：有計劃地進行月度大清理，使用PCR污染清除劑對實驗室內的大面積區域進行清除DNA/RNA氣溶膠污染物的操作。

紫外照射：每天工作完畢后，開啟紫外燈照射工作區一定時間（如30分鐘），以殺滅可能存在的微生物和降解DNA/RNA污染。在提取核酸后，應將紫外線照射時間適當延長。

更換試劑和耗材：如懷疑試劑或耗材被污染，應立即更換新的試劑和耗材，如引物、酶、去離子水和EP管等。

更換PCR擴增區域：如污染嚴重，可考慮更換PCR擴增區域，以避免交叉污染。

四、監控與應急處理

污染監控：安排質控員記錄陽性率及假陽性的發生頻率，及時發現異常。同時采集環境中的樣本進行核酸污染分析，以便盡早發現污染源并盡快清除污染。

應急處理：如PCR實驗室出現陽性率異常升高、空白對照/陰參頻繁出現假陽性或發現未知擴增條帶重復出現等情況，應立即使用PCR污染清除劑進行緊急污染源的排除和清理。

綜上所述，PCR實驗中的DNA/RNA污染需要采取綜合措施進行預防和處理。通過明確污染源、采取預防措施、及時處理污染以及加強監控與應急處理等措施，可以確保PCR實驗的準確性和可靠性。