細胞貼壁的六問六答

　　1.細胞在體外培養時應該貼壁嗎？

　　答：大部分來自實體組織器官的細胞會貼壁。它們在機體內時，也是與其他細胞或者細胞外基質結合的。一般一種細胞具有一種特定的功能，不同種細胞有機組合在一起，就能構成協同完成某些功能的器官¹。

　　2. 細胞貼壁的原理是什么？

　　答：貼壁的過程可能是這樣的：細胞首先分泌細胞外基質，這種細胞外基質黏附在支持物的表面（如培養瓶、培養皿的底面）。細胞通過其表面的黏附因子與這些細胞外基質結合。所以細胞貼壁與否與細胞本身分泌細胞外基質的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數量有關，也與培養皿壁的表面結構有關¹。培養基中的黏附蛋白也會摻入到細胞外基質中。

　　例如，曾有人用胎牛血清培養大鼠腎臟細胞，發現大鼠腎臟細胞形成的外基質層中，除了有腎臟細胞自身合成的纖黏連蛋白外，也含有胎牛血清中的纖黏連蛋白²。

　　又有人培養骨髓間充質干細胞（MSCs），發現鈷⁶⁰照射過的塑料培養瓶（照射劑量6Gy）能促進貼壁，其效果和IV型膠原包被的培養瓶相同。這可能與射線改變了培養瓶壁的表面結構有關³。

　　圖　細胞貼壁的鏡下照片

　　3. 貼壁有什么好處嗎？

　　答：貼壁對維持細胞的良好形態和促進細胞的增殖有益處。有人培養許旺細胞，發現貼壁良好的細胞，其增殖率也較高⁴。人的造血干細胞培養，更是需要有貼壁細胞構成“造血微環境”。有人發現這些貼壁細胞包括成纖維細胞，巨噬細胞，上皮樣細胞，脂肪細胞，它們交錯連接，構成網狀支架結構^5，6。

　　4. 對于某些懸浮細胞,能促進它貼壁嗎？

　　答：有人介紹過一種使懸浮的肝癌細胞貼壁的方法，即采用多聚賴氨酸浸泡過的蓋玻片，放置到培養瓶中，可使懸浮的肝癌細胞貼壁⁷。包被過其他細胞外基質的載體表面，也可促進細胞黏附。

　　5、不同細胞外基質對細胞粘附的效果一樣嗎？

　　答：不會完全一樣。具體看是哪種細胞。軟骨細胞對II型膠原的黏附性較好；上皮細胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好，而在I、II、III型膠原底物的培養板上貼壁情況較差。纖黏連蛋白能夠加速成纖維細胞貼壁，但對表皮細胞、晶狀體上皮細胞和乳腺上皮細胞貼壁則無此作用⁴。

　　圖 細胞外基質

　　6、牛血清對細胞粘附有作用嗎？

　　答：有。牛血清中含有玻連蛋白、纖黏連蛋白，對細胞粘附都有促進作用⁸。需注意，熱滅活小牛血清會降低血清對細胞粘附的促進作用，尤其在細胞旋轉培養時更為明顯⁹。

　　參考文獻

　　1. 劉梅芳、徐國恒。 細胞體外培養時為什么會貼到培養皿壁上。 生物學通報。2007,42（9）：54

　　2. Hayman EG, Ruoslahti E. Distribution of fetal bovine serum fibronectin and endogenous rat cell fibronectin inextracellular matrix. J Cell Biol. 1979 Oct;83（1）：255-9.

　　3. 吳建波，尹麗慧，等。 不同培養方法對骨髓間充質干細胞貼壁　和純度的影響。 山東醫藥，2008,48（40）：15-17

　　4. 韓巖，等。 基膜黏連蛋白和Ⅳ型膠原對培養許旺細胞貼壁及增殖的作用。 中華顯微外科雜志。 2002 , 25 （3） :194-196

　　5. 朱壬葆， 等。 人骨髓體外培養中貼壁細胞層的形態分析。 實驗生物學報。 1982 （2） :33-43

　　6. 季紅，劉永，趙林普。 小鼠骨髓細胞體外培養中貼壁細胞層的結構與作用。中國病理生理雜志， 1988 （01）

　　7. 陳桑，劉希鳳，凌茂英。 介紹一種使懸浮的肝癌細胞貼壁的方法。 大連醫科大學學報， 1992 （4） :61-62

　　8. Edward G.Hayman,et al.Vitronectin—A major cell attachment-promoting protein in fetal bovine serum.Experimental Cell Research. 1985,160（ 2）： 245-258

　　9. Donald J. Giard. Routine heat inactivation of serum reduces its capacity to promote cell attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology.1987, 23（ 10）： 691–697