珍貴細胞被細菌污染了怎么辦？

　　培養的珍貴細胞如果出現支原體的污染，細胞要保種，不舍得丟掉，我們知道可采用Minerva公司的Mynox或Mynox Gold祛除支原體（具體詳請點擊文章《細胞狀態不好，你排除過支原體嗎？》），如果出現細菌污染，我們應該怎么辦呢？

　　對于珍稀細胞系，這的確是一個難題。小威根據北京市耳鼻咽喉科研究所在一篇文章中發表的幾種解決方法，總結如下，可供感興趣的人員參考。

　　**種方法: 抗生素除菌法

　　在該文中，當一種人喉癌細胞系被懷疑有細菌污染時，研究人員將培養上清液離心，將沉淀物行常規血瓊脂培養，培養5-7d后開始出現灰白色細小菌落，經全自動細菌鑒定儀生化鑒定條檢測為嗜麥芽寡養食單胞菌，又進行了15種抗生素的藥敏實驗，發現該菌對其中3種抗生素敏感，其余均耐藥，包括對青鏈霉素耐藥。

　　圖 對多種抗生素耐藥的嗜麥芽寡養食單胞菌

　　接下來，研究人員進行了抗生素**抑菌濃度的篩選。每種抗生素配了6個濃度梯度。將受污染的細胞接種到96孔板，加入含敏感抗生素的完全培養液，24 h后換無抗生素培養液培養1d。如此重復3次，連續7d。找出**抑菌濃度后，研究人員讓細胞分別在抗生素**抑菌濃度中傳代1代至3代，發現細胞生長良好，但撤離抗生素后，重又出現細菌污染。

   作者認為：抗生物主要是抑制細菌生長，而不能完全殺死細菌。因此，有針對性地使用抗生素或許可以短期控制住細胞中污染細菌的生長，但不能根除細菌。

　　第二種方法: 抗生素聯合巨噬細胞吞噬法

　　即抗生素處理過的細胞再與小鼠的巨噬細胞共培養3d。3d后換液，棄去巨噬細胞。間隔一周后再用巨噬細胞共培養一次。結果顯示，此方法效果不佳。

　　第三種方法: 裸鼠體內接種法

　　研究人員將受污染的喉癌細胞系細胞按1×106個/ml接種裸鼠腋下皮下，連續觀察，當腫物長至約1cm3后，脫頸處死動物，無菌操作取出腫物，做組織細胞培養。

   結果顯示，腫瘤細胞接種裸鼠體內40 d后開始出現腫塊，60d長至1cm3左右。之后將組織塊培養于含上述篩選過的三種抗生素的完全培養基，14d后改用無抗生素培養，持續培養3周。結果細胞生長良好。之后自然傳代8次，凍存1個月后復蘇，細胞仍能貼壁生長。取上清液做細菌培養，結果為無菌生長。

　　作者認為，細菌在裸鼠體內可被巨噬細胞和中性粒細胞吞噬、NK細胞殺滅，以及被結合抗體的補體殺死。裸鼠體內接種法能徹底殺滅細菌，細胞上清的細菌培養為陰性。細胞生物學特性也保持良好。

　　因此，敏感抗生素的篩選和使用可以短期清除污染菌，而動物體內接種才是最有效和徹底的除菌方法。雖然上述受污染的細胞屬于腫瘤細胞系，但對其他受污染的細胞，也會帶來一定的啟示。

　　參考文獻

　　王鴻，張偉，孟娜。 細胞培養中珍貴貼壁細胞污染挽救方法的評價。 首都醫科大學學報。2011,32（1）：129-134

　　Minerva Biolabs GmbH公司簡介

　　德國Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上**的微生物污染控制公司。其最引以為豪的研發核心，體現在細胞培養和生物制藥領域的支原體、細菌和病毒污染控制，其產品和技術在世界上遙遙領先。　公司總部設立于德國柏林，專注微生物污染檢測與清除產品的研發和銷售。 公司創始人來自于全球聞名的羅伯特·科赫微生物研究所。Minerva公司最引以為豪的研發核心，體現在細胞培養和生物制藥領域的支原體、細菌和病毒污染控制。

　　此外，Minerva研發的用于『PCR診斷法的專業工具和試劑』，不僅可以檢測飲料中的微生物污染，還可以用于檢測未申報的肉類制品以及清真、素食產品的質量控制。再加上『驗證PCR儀合格性的試劑』以及『清除PCR實驗室DNA污染的試劑』，多種產品完整了Minerva的產品線，能夠滿足客戶全方面的需求。在污染控制，臨床診斷和水質的檢測領域，Minerva不遺余力地開拓進取，是實驗人員和生產企業值得信賴的合作伙伴。Minerva公司作為合作制造商，還從事分子生物學試劑、PCR分析和樣品制備試劑的設計與生產。

　　2005年，上海威正翔禹生物科技有限公司作為全國總代理，將Minerva的優秀產品引入中國。數年來，不斷為中國生物研究實驗室，以及眾多疫苗生產企業，提供了完整高效的，支原體等微生物檢測及祛除解決方案。