珍貴細(xì)胞被細(xì)菌污染了怎么辦？

　　培養(yǎng)的珍貴細(xì)胞如果出現(xiàn)支原體的污染，細(xì)胞要保種，不舍得丟掉，我們知道可采用Minerva公司的Mynox或Mynox Gold祛除支原體（具體詳請點擊文章《細(xì)胞狀態(tài)不好，你排除過支原體嗎？》），如果出現(xiàn)細(xì)菌污染，我們應(yīng)該怎么辦呢？

　　對于珍稀細(xì)胞系，這的確是一個難題。小威根據(jù)北京市耳鼻咽喉科研究所在一篇文章中發(fā)表的幾種解決方法，總結(jié)如下，可供感興趣的人員參考。

　　**種方法: 抗生素除菌法

　　在該文中，當(dāng)一種人喉癌細(xì)胞系被懷疑有細(xì)菌污染時，研究人員將培養(yǎng)上清液離心，將沉淀物行常規(guī)血瓊脂培養(yǎng)，培養(yǎng)5-7d后開始出現(xiàn)灰白色細(xì)小菌落，經(jīng)全自動細(xì)菌鑒定儀生化鑒定條檢測為嗜麥芽寡養(yǎng)食單胞菌，又進(jìn)行了15種抗生素的藥敏實驗，發(fā)現(xiàn)該菌對其中3種抗生素敏感，其余均耐藥，包括對青鏈霉素耐藥。

　　圖 對多種抗生素耐藥的嗜麥芽寡養(yǎng)食單胞菌

　　接下來，研究人員進(jìn)行了抗生素**抑菌濃度的篩選。每種抗生素配了6個濃度梯度。將受污染的細(xì)胞接種到96孔板，加入含敏感抗生素的完全培養(yǎng)液，24 h后換無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)1d。如此重復(fù)3次，連續(xù)7d。找出**抑菌濃度后，研究人員讓細(xì)胞分別在抗生素**抑菌濃度中傳代1代至3代，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長良好，但撤離抗生素后，重又出現(xiàn)細(xì)菌污染。

   作者認(rèn)為：抗生物主要是抑制細(xì)菌生長，而不能完全殺死細(xì)菌。因此，有針對性地使用抗生素或許可以短期控制住細(xì)胞中污染細(xì)菌的生長，但不能根除細(xì)菌。

　　第二種方法: 抗生素聯(lián)合巨噬細(xì)胞吞噬法

　　即抗生素處理過的細(xì)胞再與小鼠的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)3d。3d后換液，棄去巨噬細(xì)胞。間隔一周后再用巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)一次。結(jié)果顯示，此方法效果不佳。

　　第三種方法: 裸鼠體內(nèi)接種法

　　研究人員將受污染的喉癌細(xì)胞系細(xì)胞按1×106個/ml接種裸鼠腋下皮下，連續(xù)觀察，當(dāng)腫物長至約1cm3后，脫頸處死動物，無菌操作取出腫物，做組織細(xì)胞培養(yǎng)。

   結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞接種裸鼠體內(nèi)40 d后開始出現(xiàn)腫塊，60d長至1cm3左右。之后將組織塊培養(yǎng)于含上述篩選過的三種抗生素的完全培養(yǎng)基，14d后改用無抗生素培養(yǎng)，持續(xù)培養(yǎng)3周。結(jié)果細(xì)胞生長良好。之后自然傳代8次，凍存1個月后復(fù)蘇，細(xì)胞仍能貼壁生長。取上清液做細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果為無菌生長。

　　作者認(rèn)為，細(xì)菌在裸鼠體內(nèi)可被巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞吞噬、NK細(xì)胞殺滅，以及被結(jié)合抗體的補(bǔ)體殺死。裸鼠體內(nèi)接種法能徹底殺滅細(xì)菌，細(xì)胞上清的細(xì)菌培養(yǎng)為陰性。細(xì)胞生物學(xué)特性也保持良好。

　　因此，敏感抗生素的篩選和使用可以短期清除污染菌，而動物體內(nèi)接種才是最有效和徹底的除菌方法。雖然上述受污染的細(xì)胞屬于腫瘤細(xì)胞系，但對其他受污染的細(xì)胞，也會帶來一定的啟示。

　　參考文獻(xiàn)

　　王鴻，張偉，孟娜。 細(xì)胞培養(yǎng)中珍貴貼壁細(xì)胞污染挽救方法的評價。 首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報。2011,32（1）：129-134

　　Minerva Biolabs GmbH公司簡介

　　德國Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上**的微生物污染控制公司。其最引以為豪的研發(fā)核心，體現(xiàn)在細(xì)胞培養(yǎng)和生物制藥領(lǐng)域的支原體、細(xì)菌和病毒污染控制，其產(chǎn)品和技術(shù)在世界上遙遙領(lǐng)先。　公司總部設(shè)立于德國柏林，專注微生物污染檢測與清除產(chǎn)品的研發(fā)和銷售。 公司創(chuàng)始人來自于全球聞名的羅伯特·科赫微生物研究所。Minerva公司最引以為豪的研發(fā)核心，體現(xiàn)在細(xì)胞培養(yǎng)和生物制藥領(lǐng)域的支原體、細(xì)菌和病毒污染控制。

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