原代細(xì)胞培養(yǎng)小技巧（二）

原代細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中較為重要的一環(huán)，同時(shí)該實(shí)驗(yàn)也具有一定的難度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”，今天我們就來一起總結(jié)一下，原代細(xì)胞培養(yǎng)，都有哪些注意事項(xiàng)。

01

常見的原代細(xì)胞類型

上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、肝細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、毛細(xì)胞、血細(xì)胞、干細(xì)胞。

02

原代細(xì)胞的優(yōu)缺點(diǎn)

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系

能夠培養(yǎng)的細(xì)胞系，已經(jīng)獲得了通過隨機(jī)突變或通過修飾（例如癌癥基因的人工表達(dá)）轉(zhuǎn)化的癌細(xì)胞系中的無限增殖（永生化）的能力。連續(xù)細(xì)胞系通常比原代細(xì)胞更堅(jiān)固，更易于操作。它們具有無限的增長潛力，是獲取基本信息的快速簡便方法。使用連續(xù)細(xì)胞系的一些缺點(diǎn)是它們是經(jīng)過基因修飾/轉(zhuǎn)化的，可以改變生理特性并且不代表體內(nèi)狀態(tài)，并且隨著時(shí)間的流逝，這可能會(huì)進(jìn)一步改變。

而原代培養(yǎng)得來的細(xì)胞不具備無限分裂的能力，但可以相對更好地還原生物體內(nèi)細(xì)胞生長狀況。

03

倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？

倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。

04

原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中可能存在的錯(cuò)誤

污染：轉(zhuǎn)移主要組織進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)需要注意避免污染。

pH值變化：這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確，細(xì)菌或真菌污染，碳酸氫鹽緩沖液不足，二氧化碳張力不正確等引起的。

粘附性不足（細(xì)胞不貼壁）：培養(yǎng)基中不含附著因子（attachment factors）或附著因子不足，培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染，細(xì)胞被胰蛋白酶過度消化等。

生長緩慢：原因包括培養(yǎng)基的pH值變化，必需的促進(jìn)生長的成分/因子耗盡，低污染，試劑儲藏不當(dāng)?shù)取?/span>

細(xì)胞死亡：溫度波動(dòng)，二氧化碳含量過低，在融化和/或冷凍保存過程中細(xì)胞受損，有毒代謝產(chǎn)物濃度增加，培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低。

沉淀（pH不變）：由于使用了冷凍培養(yǎng)基，在pH不變的培養(yǎng)基中可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時(shí)可能會(huì)沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。

細(xì)胞結(jié)塊（細(xì)胞不貼壁且結(jié)塊）：懸浮細(xì)胞可能由于鈣、鎂離子的存在或細(xì)胞裂解及DNA釋放（過度用蛋白水解酶消化）而結(jié)塊。

誘導(dǎo)變異性：多種試劑和培養(yǎng)基會(huì)誘導(dǎo)原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異，研究者的處理手法也可能導(dǎo)致原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。