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干貨分享：細(xì)胞轉(zhuǎn)染全攻略（上）

2022-05-27 18:39來源：威正翔禹|締一生物

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)/ 轉(zhuǎn)染

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定義：細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。


分類：

按轉(zhuǎn)染途徑可分為：細(xì)胞轉(zhuǎn)染分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類。

按轉(zhuǎn)染結(jié)果可分為：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染


應(yīng)用：在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中。


總結(jié)：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。

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不同轉(zhuǎn)染途徑的比較


1.物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。

2.化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。

3.生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。


理論上，最理想的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，目前看來，雖然轉(zhuǎn)染效率最高、細(xì)胞毒性低，但整個(gè)過程比較復(fù)雜復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性。


因此，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù)，想要獲得**的轉(zhuǎn)染結(jié)果，都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行一定的優(yōu)化。


影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，從細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)，都需要考慮。


三種轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)劣都給大家準(zhǔn)備好了，有需要的同學(xué)可以截圖保存。

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不同轉(zhuǎn)染結(jié)果的比較


瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（transient transfection）


外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24~72h小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)和熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。


穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）


外源DNA既可以整合到宿主細(xì)胞中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記。如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。


血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：


  • 提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

  • 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

  • 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

  • 參與細(xì)胞凍存。

    ......


一款優(yōu)質(zhì)的血清，絕對(duì)能成為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的“最強(qiáng)輔助”。


Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：

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1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。

3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實(shí)驗(yàn)室批號(hào)優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項(xiàng)目?jī)赡瓴恍钃Q批次，細(xì)胞試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會(huì)有多批次平行供應(yīng)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室專屬批號(hào)管理，保證供貨穩(wěn)定。

5. 為Ausbian血清用戶免費(fèi)提供申報(bào)支持，具有完整的檢測(cè)報(bào)告，為各類項(xiàng)目的申報(bào)提供支持。（同時(shí)為血清VIP用戶在支原體檢測(cè)、方法學(xué)驗(yàn)證等方面，提供更多免費(fèi)延伸性技術(shù)幫助）。

6. 針對(duì)特殊科研項(xiàng)目，可提供3-5個(gè)平行批次，讓試驗(yàn)人有更多選擇空間。

7. 為Ausbian血清提供免費(fèi)代儲(chǔ)存服務(wù)，為儲(chǔ)存空間不足的實(shí)驗(yàn)室提供可靠的血清倉(cāng)儲(chǔ)保護(hù)，按要求隨時(shí)發(fā)貨。

8. Ausbian血清從出廠，到實(shí)驗(yàn)室，全程低溫冷鏈保護(hù)，確保血清無反復(fù)凍融。

9. 免費(fèi)真品保障，每個(gè)血清瓶身加貼Viansaga?易破損防偽標(biāo)簽，Ausbian品牌真品保護(hù)，逢假必究，為實(shí)驗(yàn)室做好售后保障。

10. 免費(fèi)無憂售后，所有實(shí)驗(yàn)室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計(jì)算，一年之內(nèi)，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 免費(fèi)專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個(gè)血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考。

12. Ausbian品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線：

特級(jí)胎牛血清、細(xì)胞治療專用胎牛血清（貨號(hào)：WS500T(紅點(diǎn))），透析胎牛血清 （貨號(hào)：VS500TZ   ）等多系列產(chǎn)品，服務(wù)更專業(yè)更精準(zhǔn)。


如果你對(duì)本公司產(chǎn)品感興趣，想要了解更多，歡迎訪問

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