一招解決：細(xì)胞培養(yǎng)基混用問題

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題大匯總——Part 2，繼續(xù)為小伙伴們答疑解惑！

對(duì)于購(gòu)買的商品化細(xì)胞來說，產(chǎn)品目錄或者細(xì)胞說明書上所推薦的培養(yǎng)基，一般是細(xì)胞株的原始提供者推薦的培養(yǎng)基，或者是經(jīng)過驗(yàn)證的最利于該細(xì)胞株生活的培養(yǎng)基。其他培養(yǎng)基存在一定培養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)。因此，應(yīng)謹(jǐn)慎更換培養(yǎng)基，一定要更換，推薦實(shí)驗(yàn)前預(yù)先保留一份細(xì)胞種。

更換培養(yǎng)基有兩種方法：

1、直接更換，強(qiáng)制使細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基；

2、還有一種更溫和的方法，傳代細(xì)胞的時(shí)候，將新培養(yǎng)基與原推薦使用的培養(yǎng)基1：1混合，并另外分出一板細(xì)胞，用原先推薦的培養(yǎng)基。傳代后仔細(xì)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，如果混合培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，應(yīng)立即停止更換培養(yǎng)基。若生長(zhǎng)狀態(tài)好，可以繼續(xù)傳代分瓶，一板保留原推薦培養(yǎng)基，另外一板新培養(yǎng)基與原推薦使用的培養(yǎng)基3：1混合，繼續(xù)觀察，如果細(xì)胞狀態(tài)好，可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。

普通微生物污染：培養(yǎng)基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規(guī)定棄用并全面嚴(yán)格滅菌。

支原體污染：顯微鏡很難直接觀察，細(xì)胞通常表現(xiàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，有細(xì)胞漂浮等等，可通過MB Venor?Gem qEP試劑盒，進(jìn)行支原體檢測(cè)。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，應(yīng)按規(guī)定棄用，實(shí)驗(yàn)室要及時(shí)全面消毒滅菌，防止蔓延，推薦使用MB Mycoplasma-off?對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行清理 ，使用Water Shield?對(duì)水槽進(jìn)行清潔、預(yù)防處理。如果細(xì)胞株珍貴，可用MB相關(guān)支原體祛除試劑Mynox?、Mynox? Gold、Zell Shield?對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。

細(xì)胞要養(yǎng)好，需要選擇品質(zhì)優(yōu)異的血清，如Ausbian?進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：

1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家，并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

2、有些國(guó)家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。

5、無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國(guó)家要求無細(xì)菌噬菌體污染。

6、對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。

我國(guó)對(duì)牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求：

包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，支持細(xì)胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian?胎牛血清在市場(chǎng)上頗受歡迎。它具有精選內(nèi)毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次，滿足干細(xì)胞、基因敲除、原代培養(yǎng)、細(xì)胞典藏、長(zhǎng)期傳代等各類細(xì)胞的培養(yǎng)要求；澳洲血源，完整的檢測(cè)報(bào)告及滅病毒服務(wù)，為各類臨床相關(guān)項(xiàng)目的申報(bào)提供完整支持等特點(diǎn)。